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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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hxiaomeng

新虫 (初入文坛)

[求助] Mlu1和BamH1双酶切效率低怎么破? 已有1人参与

RT,用NEB的Mlu1和BamH1双酶切,为了保证buffer一样还特意买了BamH1普通(非HF)装,但是双酶切之后就和没有被切过一样,切完之后用T4 ligase 连(体系:buffer,T4,plasmid,H2O),再做转化,转出来的菌长得一片一片的~就跟质粒酶切开似的,郁闷!求问大神这个问题怎么破?大家都这样吗?还是我的酶有问题?
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
hxiaomeng: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-11-13 13:27:40
两个酶的酶切效率直接存在差异,会导致大量的单酶切结果的出现,连回去了,转化就是这种情况。可以考虑少切点质粒。

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-11-12 23:05:04
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hxiaomeng

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-11-12 23:05:04
两个酶的酶切效率直接存在差异,会导致大量的单酶切结果的出现,连回去了,转化就是这种情况。可以考虑少切点质粒。

那您说用SAP处理一下可以么?
3楼2014-11-13 13:27:14
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Neo2000

木虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by hxiaomeng at 2014-11-13 13:27:14
那您说用SAP处理一下可以么?...

没有太大的意义

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2014-11-13 14:25:10
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afyb

铁虫 (初入文坛)

这两个酶杠杠的好用啊
长得一片可能是切得棒 连接效率高啊
你鉴定了没?不是空载体吧
5楼2014-11-14 10:52:17
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