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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » Mlu1和BamH1双酶切效率低怎么破？
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hxiaomeng

新虫 (初入文坛)

[求助] Mlu1和BamH1双酶切效率低怎么破？ 已有1人参与

RT，用NEB的Mlu1和BamH1双酶切，为了保证buffer一样还特意买了BamH1普通（非HF）装，但是双酶切之后就和没有被切过一样，切完之后用T4 ligase 连（体系：buffer，T4，plasmid，H2O），再做转化，转出来的菌长得一片一片的~就跟质粒酶切开似的，郁闷！求问大神这个问题怎么破？大家都这样吗？还是我的酶有问题？
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1楼 2014-11-12 21:17:47
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
hxiaomeng: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-11-13 13:27:40
两个酶的酶切效率直接存在差异，会导致大量的单酶切结果的出现，连回去了，转化就是这种情况。可以考虑少切点质粒。

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2014-11-12 23:05:04
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hxiaomeng

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-11-12 23:05:04
两个酶的酶切效率直接存在差异，会导致大量的单酶切结果的出现，连回去了，转化就是这种情况。可以考虑少切点质粒。

那您说用SAP处理一下可以么？
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3楼2014-11-13 13:27:14
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Neo2000

木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by hxiaomeng at 2014-11-13 13:27:14
那您说用SAP处理一下可以么？...

没有太大的意义

[ 发自小木虫客户端 ]
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4楼2014-11-13 14:25:10
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afyb

铁虫 (初入文坛)
这两个酶杠杠的好用啊
长得一片可能是切得棒 连接效率高啊
你鉴定了没？不是空载体吧
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5楼2014-11-14 10:52:17
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