应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » Mlu1和BamH1双酶切效率低怎么破？
51/1返回列表
查看: 1949  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

hxiaomeng

新虫 (初入文坛)

[求助] Mlu1和BamH1双酶切效率低怎么破？ 已有1人参与

RT，用NEB的Mlu1和BamH1双酶切，为了保证buffer一样还特意买了BamH1普通（非HF）装，但是双酶切之后就和没有被切过一样，切完之后用T4 ligase 连（体系：buffer，T4，plasmid，H2O），再做转化，转出来的菌长得一片一片的~就跟质粒酶切开似的，郁闷！求问大神这个问题怎么破？大家都这样吗？还是我的酶有问题？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-11-12 21:17:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
hxiaomeng: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-11-13 13:27:40
两个酶的酶切效率直接存在差异，会导致大量的单酶切结果的出现，连回去了，转化就是这种情况。可以考虑少切点质粒。

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2014-11-12 23:05:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hxiaomeng

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-11-12 23:05:04
两个酶的酶切效率直接存在差异，会导致大量的单酶切结果的出现，连回去了，转化就是这种情况。可以考虑少切点质粒。

那您说用SAP处理一下可以么？
赞一下 回复此楼
3楼2014-11-13 13:27:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by hxiaomeng at 2014-11-13 13:27:14
那您说用SAP处理一下可以么？...

没有太大的意义

[ 发自小木虫客户端 ]
回复此楼
4楼2014-11-13 14:25:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

afyb

铁虫 (初入文坛)
这两个酶杠杠的好用啊
长得一片可能是切得棒 连接效率高啊
你鉴定了没？不是空载体吧
赞一下 回复此楼
5楼2014-11-14 10:52:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 hxiaomeng 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 7/350 2026-11-06 12:41 by BkA9Bi5cMhkD
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 10/500 2026-11-06 12:32 by BkA9Bi5cMhkD
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 9/450 2026-11-06 12:21 by BkA9Bi5cMhkD
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +5 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 11/550 2026-11-06 12:08 by BkA9Bi5cMhkD
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +7 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 17/850 2026-11-06 11:24 by 2lRNluKrJpwL
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +7 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 13/650 2026-11-06 11:24 by 2lRNluKrJpwL
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 10/500 2026-11-06 09:01 by 2lRNluKrJpwL
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 10/500 2026-11-06 05:32 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 14/700 2026-11-06 05:11 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 kvewwGtKktqB 2026-11-04 16/800 2026-11-06 05:00 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 16/800 2026-11-06 04:58 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 14/700 2026-11-06 04:58 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 13/650 2026-11-06 04:49 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 4/200 2026-11-06 02:37 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 8/400 2026-11-06 02:24 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 9/450 2026-11-06 02:15 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 7/350 2026-11-06 02:13 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 02:04 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 01:42 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 10/500 2026-11-06 01:40 by qL1cU46YIdK0
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭