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1434304376

金虫 (初入文坛)

[求助] 做基因回复的目的基因总是扩增不出来，哪位高手进来帮帮忙，万分感谢！ 已有1人参与

最近在做基因回复，需要将目的基因连接到载体上，但是目的基因总是没有条带，条件也换了不少还是不行，不知道是引物的问题还是技术问题。希望这方面的高手能给点建议，帮忙分析一下原因。快毕业了，一直做不出来也很着急，虽然老师没有责怪，但是心里感觉还是很对不起他的，因为老师一直对我们都很好，所以也希望在毕业前尽量把这个课题往前推进，因为老师也很有压力，这也算是对他的报答吧。
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1楼 2014-11-11 22:09:55
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guohengxi

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是第一步扩增就没有条带吗？先确定引物、模板没有出错，引物可以找老师帮你看一下设计的有没有问题，模板确定一下是不是和你设计引物的基因序列一样（有时同样的基因名在不同种属中序列也是不一样的），如果这两个都没有问题，那么看看是不是退火温度不合适，祝好运哈
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2楼2014-11-12 10:52:39
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1434304376

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by guohengxi at 2014-11-12 10:52:39
是第一步扩增就没有条带吗？先确定引物、模板没有出错，引物可以找老师帮你看一下设计的有没有问题，模板确定一下是不是和你设计引物的基因序列一样（有时同样的基因名在不同种属中序列也是不一样的），如果这两个都 ...

是的，是第一步，退火温度也试了很多，但还是不行。我想问一下这种引物很长的反应是不是很不容易扩增？
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3楼2014-11-13 14:31:35
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