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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 连接转化后平板生长不正常，各路神仙帮忙分析一下吧。
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五维度的爱

金虫 (小有名气)

[交流] 连接转化后平板生长不正常，各路神仙帮忙分析一下吧。

最近做转化，平板生长状况如下图所示，感觉平板好像污染了一样。这平板是卡纳抗性的，上周用的时候转化连接产物还蛮正常，这周再用的时候就成这样了，而且挑取单克隆用引物去扩增卡纳基因时，有目的条带出现。

连接转化后平板生长不正常，各路神仙帮忙分析一下吧。
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连接转化后平板生长不正常，各路神仙帮忙分析一下吧。-1
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1楼 2014-10-22 10:28:00
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灰血动物

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
五维度的爱: 金币+1, 谢谢您的建议！ 2014-10-23 17:02:44
平板放在4°也无法保证菌体不污染，何况楼主还放了一周

这个是正常的，卡纳降解导致外源污染，或者是原来细菌经过长时间适应，重新站了起来。。。。

给楼主的建议是 重新转化

因为你调到的单菌落势必会沾染旁边的“污染”，你通过提质粒、酶切、PCR、测序等手段都能得到阳性结果，可是你的培养体系中却肯定有污染物的存在。。。。。


如果你非要使用的话，建议你将+克隆重新培养后 划线分离，结果会较为干净

加油
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未完成
8楼2014-10-23 15:22:22
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林家女孩

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
五维度的爱: 金币+1, 挑取菌落验证时不是我要的克隆 2014-10-23 16:59:18
这一大坨的是什么？大个菌落和小个菌落都有拿去验证吗？
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2楼2014-10-22 10:52:26
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koujie1986

铜虫 (初入文坛)
★ ★
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kx444555: 鼓励交流 2014-10-22 12:24:14
五维度的爱: 金币+1, 您所说的特异性引物是？ 2014-10-23 16:59:58
首先，我觉得你应该先排除大菌落是不是因为涂板不均匀、小菌落融合形成的。其次，既然平板是卡纳抗性的，菌能长起来也就说明有抗卡纳作用，扩增卡纳基因有啥意义？建议换一对特异引物测试。如果大、小菌落是不同的菌，说明操作环境有污染。
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3楼2014-10-22 11:28:28
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jian212

铜虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
五维度的爱: 金币+1, 谢谢！ 2014-10-23 17:00:19
这个样子的平板肯定是操作过程中带入了杂菌污染所致。
挑正常的菌落鉴定就行，杂菌不要紧。
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学习再学习，努力再努力。
4楼2014-10-22 14:09:47
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