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汕头大学海洋科学接受调剂
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我就是保哥哥

金虫 (小有名气)

[求助] 连接转化后提质粒做酶切,可以切出带,做质粒PCR却P不出来,为什么??? 已有10人参与

质粒是PCM351,连接转化后挑菌落提质粒,然后做酶切跑胶,可以很明显的看到切下的条带,大小也正确,但用质粒做PCR后却跑不出条带,,这是什么原因啊,快疯了。
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happydove

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
我就是保哥哥: 金币+2, 有帮助 2014-10-23 16:28:49
楼主,PCR体系没看到你加的酶
首先你分析一下载体的酶切位点,然后PCR时有个阳性对照,酶切设阴性对照了吗?
13楼2014-10-23 11:19:38
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
我就是保哥哥: 金币+2, 有帮助 2014-10-20 15:53:04
我也遇到过相同的情况,可以切出来,但是PCR的时候没有条带···我之所以做PCR,是因为我酶切之后的片段比预想的片段少大概1000bp,所以想用PCR鉴定一下,但没有P出来···个人认为酶切比PCR靠谱···
···
2楼2014-10-20 15:51:42
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我就是保哥哥

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 小冀- at 2014-10-20 15:51:42
我也遇到过相同的情况,可以切出来,但是PCR的时候没有条带···我之所以做PCR,是因为我酶切之后的片段比预想的片段少大概1000bp,所以想用PCR鉴定一下,但没有P出来···个人认为酶切比PCR靠谱···

我是转化后挑了16个菌落做菌落PCR,但是P不出来或者非常非常模糊,所以我直接提质粒酶切了,奇怪的是酶切的16个样本都切出来了,就是说我的连接效率是100%,所以这个概率太高了,才做的质粒PCR,结果一个没有P出来。一般来说质粒PCR有结果,酶切没结果是可疑的;但我的酶切有结果,质粒PCR却没结果,这个是为什么呢,我想不通呀,,,压力好大
3楼2014-10-20 15:58:08
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谢铮

至尊木虫 (著名写手)

爱分子爱实验

请问你用的是什么引物?
博学好友张弛有度
4楼2014-10-20 16:33:50
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