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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » [求助] PCR试剂加入顺序
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humants

金虫 (正式写手)

[交流] [求助] PCR试剂加入顺序

弱弱的问题，本人打算做PCR好像听人说要注意试剂加入的顺序,在网上搜了半天只有标准反应体系，并没有加入顺序阿？
用不用使用751测一下模板的浓度？
有哪位虫友能帮帮我？谢谢...
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1楼 2008-05-03 11:03:45
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
★ ★
sxdxrhyy(金币+2,VIP+0):鼓励！
（水,dNTP,Taq,buffer,MgCl2,引物）按顺序混合后在每管分装，然后加cDNA。我是这样做的。
一般OD260值在0.2就够浓度了。

[ Last edited by jurkat.1640 on 2008-5-3 at 12:04 ]
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2楼2008-05-03 12:03:02
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passion_jh

铜虫 (初入文坛)
★ ★
sxdxrhyy(金币+2,VIP+0):鼓励！
我基本是最后加Taq的
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3楼2008-05-03 13:22:18
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江流儿

木虫 (正式写手)
最后加Taq，其他无所谓吧
最好先加便宜的
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4楼2008-05-03 15:40:38
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lauren180

木虫 (著名写手)

小木虫挖井人
水,buffer（MgCl2），dNTP，引物,Taq，模板
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细推物理须行乐。
5楼2008-05-03 16:27:23
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hihoney

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★
sxdxrhyy(金币+2,VIP+0):鼓励！
humants(金币+1,VIP+0):谢谢。。。。
水
buffer(两者为缓冲体系)
dNTP
MgCl2
引物
Taq（易失活）

[ Last edited by hihoney on 2008-5-3 at 16:29 ]
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6楼2008-05-03 16:27:59
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sunbinice

银虫 (初入文坛)
只要最后加酶就可以了，我一般是最先加水，酶一般都是最后加的，其他的无所谓
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7楼2008-05-03 18:16:49
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victoryliving

金虫 (小有名气)
水,buffer+MgCl2，dNTP，引物,Taq，模板
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8楼2008-05-03 18:59:06
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辛雨237

铁杆木虫 (著名写手)
模板最后加，其他无所谓
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春暖花开
9楼2008-05-03 20:10:43
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jerome711

银虫 (小有名气)
★
humants(金币+1,VIP+0):谢谢，我的实验已经出结果了，加入顺序无所谓，我是先加了水，后加的酶等。
我也是最后加TAG，一般都是从量大的开始加。不过少量加入的话一定要加到液面以下，这样才放心阿。
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做懂得生活的人
10楼2008-05-03 22:33:10
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