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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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humants

金虫 (正式写手)

[交流] [求助] PCR试剂加入顺序

弱弱的问题,本人打算做PCR好像听人说要注意试剂加入的顺序,在网上搜了半天只有标准反应体系,并没有加入顺序阿?
用不用使用751测一下模板的浓度?
有哪位虫友能帮帮我?谢谢...
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

★ ★
sxdxrhyy(金币+2,VIP+0):鼓励!
(水,dNTP,Taq,buffer,MgCl2,引物)按顺序混合后在每管分装,然后加cDNA。我是这样做的。
一般OD260值在0.2就够浓度了。

[ Last edited by jurkat.1640 on 2008-5-3 at 12:04 ]
2楼2008-05-03 12:03:02
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passion_jh

铜虫 (初入文坛)

★ ★
sxdxrhyy(金币+2,VIP+0):鼓励!
我基本是最后加Taq的
3楼2008-05-03 13:22:18
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江流儿

木虫 (正式写手)

最后加Taq,其他无所谓吧
最好先加便宜的
4楼2008-05-03 15:40:38
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lauren180

木虫 (著名写手)

小木虫挖井人

水,buffer(MgCl2),dNTP,引物,Taq,模板
细推物理须行乐。
5楼2008-05-03 16:27:23
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hihoney

铁杆木虫 (职业作家)


★ ★ ★
sxdxrhyy(金币+2,VIP+0):鼓励!
humants(金币+1,VIP+0):谢谢。。。。

buffer(两者为缓冲体系)
dNTP
MgCl2
引物
Taq(易失活)

[ Last edited by hihoney on 2008-5-3 at 16:29 ]
6楼2008-05-03 16:27:59
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sunbinice

银虫 (初入文坛)

只要最后加酶就可以了,我一般是最先加水,酶一般都是最后加的,其他的无所谓
7楼2008-05-03 18:16:49
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victoryliving

金虫 (小有名气)


水,buffer+MgCl2,dNTP,引物,Taq,模板
8楼2008-05-03 18:59:06
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辛雨237

铁杆木虫 (著名写手)

模板最后加,其他无所谓
春暖花开
9楼2008-05-03 20:10:43
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jerome711

银虫 (小有名气)


humants(金币+1,VIP+0):谢谢,我的实验已经出结果了,加入顺序无所谓,我是先加了水,后加的酶等。
我也是最后加TAG,一般都是从量大的开始加。不过少量加入的话一定要加到液面以下,这样才放心阿。
做懂得生活的人
10楼2008-05-03 22:33:10
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