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846031273

铜虫 (小有名气)

[求助] 基因克隆 已有1人参与

各位虫友们，我在克隆一个玉米基因，引物是从CDS区两端UTR区域设计的，测序结果竟然中间多了一段序列，NCBI比对发现，我的目的基因是完全包含在另一个基因里面的，那个基因正好CDS区比我的目的基因多了中间这段，看有虫友说可以用overlap PCR技术进行重组，不知道还有没有其他有效的方法？比如我想引物不变，测序成功之后直接敲除中间多余的序列，有没有这样做的呢？
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1楼 2014-10-17 11:17:50
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lixg

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果中间这一段的长度足以导致PCR产物电泳时能够跑出两条带来的话，切胶回收较短的片段，那应该就是你的目的基因，连接转化测序即可。
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2楼2014-10-18 14:34:23
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846031273

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lixg at 2014-10-18 14:34:23
如果中间这一段的长度足以导致PCR产物电泳时能够跑出两条带来的话，切胶回收较短的片段，那应该就是你的目的基因，连接转化测序即可。

谢谢你的回复，但是电泳只有一条带，这两个基因两端都是一样的所以引物克出来的不是我的目的基因
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3楼2014-10-19 20:03:42
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