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cxw1027

金虫 (正式写手)

旅行

[求助] 半制备高效液相柱子10x250mml上样体积最多有多少? 已有1人参与

我最近在做的一个东东溶解度不太好,大概在流动相溶剂中浓度最多能达到5mg/ml的样子,使用的半制备高效液相配了一个1ml的样品环,因为样品比较珍贵,想问问进多少体积的样品能达到最大的分离效率和最小损失?
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torekill

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

杂质的量很大吗?如果大到影响分离就要先去掉,或者保留时间太长,严重影响分离效率就要去掉   

分析柱上能达到基线分离的话,10mm制备柱上也能达到,就是看保留时间差别大不大     稍微大一点就接得纯
4楼2014-10-16 17:19:25
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torekill

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
5mg/mL的溶解度还算可以,进样体积多少是看峰分得开不开,分得开可以多进一点,一般来说,10mm内径的柱子进200μL这样。

还有你的样品总共有多少毫克?如果是15mg以上,最后搜集到的样品肯定足够打谱

建议你先进样50μL,试一次,然后慢慢增大进样量

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2楼2014-10-16 16:40:26
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cxw1027

金虫 (正式写手)

旅行

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by torekill at 2014-10-16 16:40:26
5mg/mL的溶解度还算可以,进样体积多少是看峰分得开不开,分得开可以多进一点,一般来说,10mm内径的柱子进200μL这样。

还有你的样品总共有多少毫克?如果是15mg以上,最后搜集到的样品肯定足够打谱

建议你先 ...

要进的样品是许6个微量化合物的混合物,总量大概有70mg,进样10微升的时候大概能够达到基线分离。
样品里面还混有70mg左右的一个杂质,是在上次富集时没有清除完全留下的,考虑到这个大杂质的处理,是否应该再在常规柱上处理一下再进行制备?
努力、上进
3楼2014-10-16 16:57:39
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cxw1027

金虫 (正式写手)

旅行

引用回帖:
4楼: Originally posted by torekill at 2014-10-16 17:19:25
杂质的量很大吗?如果大到影响分离就要先去掉,或者保留时间太长,严重影响分离效率就要去掉   

分析柱上能达到基线分离的话,10mm制备柱上也能达到,就是看保留时间差别大不大     稍微大一点就接得纯

先进0.1ml看一下分离情况。
另外,还有一个问题不太懂——在资料中看到“如果使用样品环,进样量需大于样品环容量的3~5倍”多余出来的样品是不是直接流掉损失了?“不使用样品环时,进样量小于样品环容量的1/2”是不是在这种情况下才能达到最好的分离?
努力、上进
5楼2014-10-16 17:49:14
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