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cyanobacter金虫 (小有名气)
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用CFP和YFP做FRET,但是CFP和YFP出现串色是什么原因?
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各位虫友,大家好,我最近在构建FRET的表达质粒,遇到一个问题。 我用CFP和YFP先分别在细胞中表达,然后用激光共聚焦观察,可是很奇怪,CFP在自己的激发波长433nm下看不到荧光,需要先用紫外365nm照一会儿,再转到CFP的通道(激发433nm,发射476nm)才能看到荧光。 同样YFP也是这样,需要先转到紫外通道照一会,然后再用YFP的通道看能看到明显的荧光,单独只用YFP的通道也看不到。 请问各位虫友又遇到过这种情况吗?是什么原因导致这种情况,如果都需用紫外来激发的话,那FRET也就没法做了。请大家帮忙啊! |
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