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tangzonghao

金虫 (正式写手)

[求助] 蛋白印迹缺条带 已有1人参与

做的蛋白印迹电泳浓缩胶浓度5%,分离胶6%的,但是跑完胶发现marker较以往的条带明显位置偏下,并且现在跑到72KD就把胶跑完了,想请教一下各位大侠是什么原因呢
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紫色的风

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
tangzonghao: 金币+1, 有帮助 2014-10-14 18:23:31
没太看懂题目  是跑过了?把分离胶浓度提高一些,跑的时间缩短
2楼2014-10-14 11:24:03
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tangzonghao

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 紫色的风 at 2014-10-14 11:24:03
没太看懂题目  是跑过了?把分离胶浓度提高一些,跑的时间缩短

是这样的,本来marker应该有10个条带,但是跑到72kd也就是第4个条带的时候就把胶板跑完了,导致72kd就在最底下(本来marker最底下一个条带应该是10kd的),下面还有6个条带就没有了,我的蛋白是120kd的,蛋白应该在里面了只是actin就没有了
3楼2014-10-14 18:23:19
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hotbird007

版主 (知名作家)

优秀版主优秀版主

引用回帖:
3楼: Originally posted by tangzonghao at 2014-10-14 18:23:19
是这样的,本来marker应该有10个条带,但是跑到72kd也就是第4个条带的时候就把胶板跑完了,导致72kd就在最底下(本来marker最底下一个条带应该是10kd的),下面还有6个条带就没有了,我的蛋白是120kd的,蛋白应该在 ...

方法一:换Maker
方法二:把电压调低,跑胶时间缩短
方法三:减少浓缩胶的长度。
每个人都会坚持自己的信念,在别人看来是浪费时间,他/她却觉得重要!--所以应助文献对,请打5星!
4楼2014-10-14 19:23:38
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紫色的风

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by tangzonghao at 2014-10-14 18:23:19
是这样的,本来marker应该有10个条带,但是跑到72kd也就是第4个条带的时候就把胶板跑完了,导致72kd就在最底下(本来marker最底下一个条带应该是10kd的),下面还有6个条带就没有了,我的蛋白是120kd的,蛋白应该在 ...

嗯,感觉像是跑过了。同楼上,换marker在试一试,如果还是这样,基本就确定是跑过了
5楼2014-10-15 11:17:39
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tangzonghao

金虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 紫色的风 at 2014-10-15 11:17:39
嗯,感觉像是跑过了。同楼上,换marker在试一试,如果还是这样,基本就确定是跑过了...

换了marker然后换了sds又加大了分离胶浓度,问题解决了,不过感觉应该还是胶的问题
6楼2014-10-15 14:56:27
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紫色的风

银虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by tangzonghao at 2014-10-15 14:56:27
换了marker然后换了sds又加大了分离胶浓度,问题解决了,不过感觉应该还是胶的问题...

不好说啊,好多试验就这样,很难确定问题出在哪
7楼2014-10-15 16:40:33
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