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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 蛋白印迹缺条带
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tangzonghao

金虫 (正式写手)

[求助] 蛋白印迹缺条带 已有1人参与

做的蛋白印迹电泳浓缩胶浓度5%，分离胶6%的，但是跑完胶发现marker较以往的条带明显位置偏下，并且现在跑到72KD就把胶跑完了，想请教一下各位大侠是什么原因呢
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1楼 2014-10-14 10:42:27
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紫色的风

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
tangzonghao: 金币+1, ★有帮助 2014-10-14 18:23:31
没太看懂题目  是跑过了？把分离胶浓度提高一些，跑的时间缩短
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2楼2014-10-14 11:24:03
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tangzonghao

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 紫色的风 at 2014-10-14 11:24:03
没太看懂题目  是跑过了？把分离胶浓度提高一些，跑的时间缩短

是这样的，本来marker应该有10个条带，但是跑到72kd也就是第4个条带的时候就把胶板跑完了，导致72kd就在最底下（本来marker最底下一个条带应该是10kd的），下面还有6个条带就没有了，我的蛋白是120kd的，蛋白应该在里面了只是actin就没有了
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3楼2014-10-14 18:23:19
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hotbird007

版主 (知名作家)

优秀版主优秀版主
引用回帖:
3楼: Originally posted by tangzonghao at 2014-10-14 18:23:19
是这样的，本来marker应该有10个条带，但是跑到72kd也就是第4个条带的时候就把胶板跑完了，导致72kd就在最底下（本来marker最底下一个条带应该是10kd的），下面还有6个条带就没有了，我的蛋白是120kd的，蛋白应该在 ...

方法一：换Maker
方法二：把电压调低，跑胶时间缩短
方法三：减少浓缩胶的长度。
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每个人都会坚持自己的信念，在别人看来是浪费时间，他/她却觉得重要!--所以应助文献对，请打5星！
4楼2014-10-14 19:23:38
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紫色的风

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by tangzonghao at 2014-10-14 18:23:19
是这样的，本来marker应该有10个条带，但是跑到72kd也就是第4个条带的时候就把胶板跑完了，导致72kd就在最底下（本来marker最底下一个条带应该是10kd的），下面还有6个条带就没有了，我的蛋白是120kd的，蛋白应该在 ...

嗯，感觉像是跑过了。同楼上，换marker在试一试，如果还是这样，基本就确定是跑过了
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5楼2014-10-15 11:17:39
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tangzonghao

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 紫色的风 at 2014-10-15 11:17:39
嗯，感觉像是跑过了。同楼上，换marker在试一试，如果还是这样，基本就确定是跑过了...

换了marker然后换了sds又加大了分离胶浓度，问题解决了，不过感觉应该还是胶的问题
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6楼2014-10-15 14:56:27
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紫色的风

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by tangzonghao at 2014-10-15 14:56:27
换了marker然后换了sds又加大了分离胶浓度，问题解决了，不过感觉应该还是胶的问题...

不好说啊，好多试验就这样，很难确定问题出在哪
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7楼2014-10-15 16:40:33
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