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ranhaochen2新虫 (初入文坛)
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天冬酰胺酶酶活测定中的一点疑问
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请教一下各位前辈，下面测酶活的方法中，0.07是怎么来的、是个什么意思。要是能解释一下这个公式为什么这么算就更好了。 实验方法： 吸取1ml菌液入Ep管，12 000 r/min离心5min，收集菌体弃去上清，加入蒸馏水1ml洗涤，混悬，12 000r/min离心5min，弃上清。重复上述操作2～3次，加入pH8.4硼酸缓冲液1ml混悬。 准备一组(2支)蒸馏水准备管：取10ml的洁净试管2只，每管加3.5ml蒸馏水。 另取2支10ml的洁净试管，分别加入0.04 mol/L天冬酰胺底物，0.1 mol/L pH8.4硼酸缓冲液各1ml，37℃水浴5min，其中一只加入细胞悬液20μl，另一支为对照管。反应15min后分别加入50%三氯乙酸1ml终止反应。再从终止反应管中各支取500μl进蒸馏水准备管，每管分别加入与25%NaOH以1:1配好的奈氏液1ml显色，500nm处测OD值。 计算： 酶活力(U)=[(OD×1000)/(0.07×15x)]×(3+x/1000) 。x为取样体积(本实验为20μl) |
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