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ranhaochen2新虫 (初入文坛)
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天冬酰胺酶酶活测定中的一点疑问
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请教一下各位前辈,下面测酶活的方法中,0.07是怎么来的、是个什么意思。要是能解释一下这个公式为什么这么算就更好了。 实验方法: 吸取1ml菌液入Ep管,12 000 r/min离心5min,收集菌体弃去上清,加入蒸馏水1ml洗涤,混悬,12 000r/min离心5min,弃上清。重复上述操作2~3次,加入pH8.4硼酸缓冲液1ml混悬。 准备一组(2支)蒸馏水准备管:取10ml的洁净试管2只,每管加3.5ml蒸馏水。 另取2支10ml的洁净试管,分别加入0.04 mol/L天冬酰胺底物,0.1 mol/L pH8.4硼酸缓冲液各1ml,37℃水浴5min,其中一只加入细胞悬液20μl,另一支为对照管。反应15min后分别加入50%三氯乙酸1ml终止反应。再从终止反应管中各支取500μl进蒸馏水准备管,每管分别加入与25%NaOH以1:1配好的奈氏液1ml显色,500nm处测OD值。 计算: 酶活力(U)=[(OD×1000)/(0.07×15x)]×(3+x/1000) 。x为取样体积(本实验为20μl) |
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