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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » qPCR每个孔加多少cDNA怎么确定
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人

[求助] qPCR每个孔加多少cDNA怎么确定 已有3人参与

做了内参和研究对象的qPCR标准曲线，接下来怎么确定我对照组和实验组每个孔各加多少cDNA合适呢？
我只是为了确定delta delta CT
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
1楼 2014-10-09 08:20:13
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hl5210

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-10-09 12:04:13
每个实验室的体系不太一样，和试剂也有关，你可以自己优化做适合的体系
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2楼2014-10-09 10:05:08
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
fuyuandj86: 金币+15, ★★★很有帮助 2014-10-13 04:10:41
10 - 100 ng，根据基因丰度而定。
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3楼2014-10-11 10:44:24
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504775490

金虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
fuyuandj86: 金币+15, ★★★很有帮助 2014-10-13 04:10:49
楼主的实验样本要是同一批处理进行了提RNA反转录同样RNA样品的话，可以挑选其中一个反转录过后的cDNA样品做一个浓度的稀释梯度，先跑一遍看看内参基因的Ct值，选取合适的稀释浓度，进行实验即可，祝好运~~
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4楼2014-10-11 11:23:11
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