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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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yaoyaochong

银虫 (正式写手)

[交流] PCR求助

我现在需要PCR 4kb 的片段，模板是基因组DNA，以前没做过这么长的，PCR两次了都没出来，请问，做这样的反应需要注意什么，请给点经验，谢谢了，急！！！
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1楼 2008-04-28 08:41:31
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paulajjh

木虫 (著名写手)

求助

我是一位新手,我做的是将一个菌的一段基因P出来,但这个菌的全基因组序列未知,用的同源性很近的另外已经发表的菌的全序列设计的引物,刚开始P,有条带,很浅,但与发表的序列长度有出入.后来一直P了一个多月,再也出不来条带了,同样的条件也没出来过.我试了很多途径,包括优化条件,梯度PCR,降落PCR等等,但都没有结果.我该怎么办???
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11楼2008-04-28 20:55:17
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biogefart

木虫 (著名写手)

贴上你的条件看看

不然怎么提意见？
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闹太套
2楼2008-04-28 08:44:08
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yaoyaochong

银虫 (正式写手)
谢谢楼上，
体系是premix tag 12.5ul
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          72        4min
          72        10min



还请帮帮忙
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3楼2008-04-28 08:52:45
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游侠892

铁杆木虫 (著名写手)
你的退火温度是经过PCR梯度试验得到的吗？
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路漫漫其修远兮，吾将上下而求索
4楼2008-04-28 09:00:45
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