24小时热门版块排行榜    

查看: 405  |  回复: 11
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

yaoyaochong

银虫 (正式写手)

[交流] PCR求助

我现在需要PCR 4kb 的片段,模板是基因组DNA,以前没做过这么长的,PCR两次了都没出来,请问,做这样的反应需要注意什么,请给点经验,谢谢了,急!!!
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

paulajjh

木虫 (著名写手)

求助

我是一位新手,我做的是将一个菌的一段基因P出来,但这个菌的全基因组序列未知,用的同源性很近的另外已经发表的菌的全序列设计的引物,刚开始P,有条带,很浅,但与发表的序列长度有出入.后来一直P了一个多月,再也出不来条带了,同样的条件也没出来过.我试了很多途径,包括优化条件,梯度PCR,降落PCR等等,但都没有结果.我该怎么办???
11楼2008-04-28 20:55:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

biogefart

木虫 (著名写手)

贴上你的条件看看

不然怎么提意见?
闹太套
2楼2008-04-28 08:44:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yaoyaochong

银虫 (正式写手)

谢谢楼上,
体系是premix tag 12.5ul
         primer 1:    1ul
         primer 2:  1ul
         template: 1ul
         water:       9.5ul

cycle:
         95        5min
         95        1min
         42         1min     30cycles
          72        4min
          72        10min



还请帮帮忙
3楼2008-04-28 08:52:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

游侠892

铁杆木虫 (著名写手)

你的退火温度是经过PCR梯度试验得到的吗?
路漫漫其修远兮,吾将上下而求索
4楼2008-04-28 09:00:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
信息提示
请填处理意见