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爱一生恋一世银虫 (小有名气)
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酶切回收 已有3人参与
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| 研一新生，这两天都在做酶切回收，酶切一个重组质粒和PKC1139 ，1139酶切后电泳条带比较亮，重组质粒切了很多次都不亮，加入的量从3ul 到8ul都不亮， 请问下这其中可能的原因是什么？然后回收pkc1139，完全按照步骤来的，可是回收不到，想请问各位大神，在回收的过程中应注意什么啊？ |
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2楼2014-10-03 17:20:41
随风飘摇11
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3楼2014-10-03 19:05:13
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【答案】应助回帖
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先看看你的质粒是不是低拷贝的，可以先把刚提出来的质粒点1ul看看亮度，如果低拷贝，那就多摇点菌多提点质粒浓缩一下，这是质粒的问题。第二，你说酶切你只加最多8ul体系？！几个意思？只加8ul质粒？不会吧，我们一般都要根据质粒浓度加到2ug的。然后，你的酶注意一下在共用buffer里的酶切效率，和在质粒图谱上的距离等等，这些应该都是你在设计引物的时候就已经考虑进去了。最后，回收的话，现在应该都是用的试剂盒了，按照说明书的步骤，没有特别要注意的，随便一回收都能回收出来东西的，至于你说回收不出来东西，我猜多数是你质粒本身的原因（低拷贝），然后你酶切体系太小导致的 [ 发自小木虫客户端 ] |
4楼2014-10-03 19:12:17
zergbloody
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5楼2014-10-04 23:24:20
