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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 重组蛋白为什么分子量变为原来的3倍了？
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zdwxxw

至尊木虫 (著名写手)

[求助] 重组蛋白为什么分子量变为原来的3倍了？ 已有5人参与

如题，原来的蛋白表达出来是15kda左右，跟理论值一致，为什么改变了一些密码子之后，表达出来的东西是45kda左右？关键是生物活性跟原来的一样，是不是变成了二聚体或者三聚体了？有木有遇到类似情况的虫友，怎么破？
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踏踏实实做好自己，其他的事与你无关。
1楼 2014-09-28 16:58:38
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keke226

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

煮样的时候加些DTT或2—巯基乙醇就可以打开二硫键。如果还是那么大，也可能是你蛋白序列的问题，SDS是疏水的，如果你改造序列后的蛋白中亲水氨基酸很多，也可能导致其结合SDS的能力下降，所带负电荷减少，从而导致电泳迁移距离变短、表观分子量偏大也是有可能的。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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读书廿年倦写字，如今翻书不识志，若知眷书悔前程，无如渔樵未识时。三年担柴熟山性，三年苦网谙水汹，前程在心自倦舒，识志何用书中清。
14楼2014-10-06 12:03:37
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langzian

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-09-29 11:17:41
zdwxxw: 金币+5, ★有帮助, 恩呢，我看看 2014-09-29 20:50:43
SDS_PAGE 是不会有二聚体的，除非二硫键，你可以变性电泳试试

[ 发自小木虫客户端 ]
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江山
2楼2014-09-28 18:50:34
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bio_sci

捐助贵宾 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-09-29 11:17:44
zdwxxw: 金币+5, ★有帮助, 恩恩，找找文献看看 2014-09-29 20:51:44
三聚体，一般是这个原因，sds有时不能完全打开四级结构的

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3楼2014-09-28 19:00:07
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ccandcc

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-09-29 11:17:48
zdwxxw: 金币+5, ★有帮助, 哦哦，我试试哈 2014-09-29 20:50:19
进样之前多煮沸一会，我觉得是没完全打开
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4楼2014-09-29 10:22:06
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