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反对派银虫 (正式写手)
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如何判断蛋白的含量下调是否与泛素化蛋白酶体降解有关?
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药物处理肿瘤细胞后,发现有一个蛋白下调,想知道其下调是否与泛素化蛋白酶体降解有关。但关于这个实验的原理和设计上有很多不懂的问题: 1.是否可以用MG132预处理细胞,再用药物处理,比较MG132处理与否,该蛋白含量的变化幅度有无改变? 2.文献中常用MG132预处理细胞,再用药物处理,比较MG132处理与不处理后,WB检测泛素的含量的变化(多条带的smear)。试问:如果是经过泛素化降解,泛素条带是变浓还是变浅?还有觉得这样的实验设计不能说明问题,就算泛素化条带发生变化,也不能说明目的蛋白是被泛素化蛋白酶体降解的,而可能是细胞很多其它蛋白经历泛素化降解所致。 3.如果目标蛋白被泛素化降解,那么目标蛋白上肯定连接有不同数量的泛素,导致其分子量大小不一,用抗目标蛋白的抗体检测目标蛋白,就会出现多条带? 4. 未经如何处理的细胞,用泛素化抗体检测,也出现多条带的smear,这是否说明细胞内的泛素化降解随时都存在,而与药物处理无关? |
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