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银虫 (正式写手)

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注册: 2012-07-12
专业: 生物物理、生物化学与分子

[求助] 如何判断蛋白的含量下调是否与泛素化蛋白酶体降解有关？

药物处理肿瘤细胞后，发现有一个蛋白下调，想知道其下调是否与泛素化蛋白酶体降解有关。但关于这个实验的原理和设计上有很多不懂的问题：
1.是否可以用MG132预处理细胞，再用药物处理，比较MG132处理与否，该蛋白含量的变化幅度有无改变？
2.文献中常用MG132预处理细胞，再用药物处理，比较MG132处理与不处理后，WB检测泛素的含量的变化（多条带的smear）。试问：如果是经过泛素化降解，泛素条带是变浓还是变浅？还有觉得这样的实验设计不能说明问题，就算泛素化条带发生变化，也不能说明目的蛋白是被泛素化蛋白酶体降解的，而可能是细胞很多其它蛋白经历泛素化降解所致。
3.如果目标蛋白被泛素化降解，那么目标蛋白上肯定连接有不同数量的泛素，导致其分子量大小不一，用抗目标蛋白的抗体检测目标蛋白，就会出现多条带？
4. 未经如何处理的细胞，用泛素化抗体检测，也出现多条带的smear，这是否说明细胞内的泛素化降解随时都存在，而与药物处理无关？

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