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大肠杆菌RED基因敲除4个月总是得不到阳性克隆，求大神指导！！！
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最近一直在做大肠杆菌的基因敲除，可是4个月一个基因都没敲下来，总是电转后得不到阳性克隆，也就是说抗性片段没有整合到染色体上，卡在这一步！！！ 制取的片段应该没有问题，感受态制作是大肠杆菌K12（PKD46），电击条件：2.5KV,5ms,2mm电转杯，电击后37度后培养1.5小时涂板，可是长出的单菌落都是假阳性的。 |
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