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蓝林幽梦

新虫 (初入文坛)

[求助] 菌落pcr 已有5人参与

构建好的载体并且测序正确,电转入农杆菌中长的很好,划线后做菌落pcr却无条带,重复很多次都没有条带,求助!!!
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
蓝林幽梦(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-09-17 19:36:55
蓝林幽梦: 金币+6, 有帮助 2014-09-18 11:24:31
用你的质粒做一次PCR看看有目的条带没?如果有,就是没转进去,再转,或者多做几个农杆菌鉴定,同时倒新的培养基。
如果没有,那就换一条引物试试,或者提质粒酶切一下。
4楼2014-09-17 19:24:21
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JamesZu

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
蓝林幽梦(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-09-17 19:36:36
1:菌被污染了;2:平板没起到筛选的作用;个人觉得可以讲质粒在酶切验证下!
2楼2014-09-17 18:01:03
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zhoumin-09

木虫 (小有名气)

铁杆木虫

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
蓝林幽梦(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-09-17 19:36:47
除了假克隆以外,有必要看PCR环节,如果凝胶上引物多聚体都没,估计得重新设计了

[ 发自小木虫客户端 ]
谨言慎行
3楼2014-09-17 18:17:05
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

“如果没有,那就换一条引物试试,或者提质粒酶切一下。”
这个意思是:如果质粒没扩出来目的条带,那可能农杆菌夜扩不出来。这时,你随机提1-2个农杆菌的质粒,酶切下看看,大肠杆菌的质粒同时酶切做个对照。
5楼2014-09-17 19:27:59
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