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花尾巴猪98

铁虫 (初入文坛)

[求助] 湖泊底泥DNA提取的问题 已有4人参与

我在做湖泊底泥微生物DNA的提取。可是提取过程中,发现杂质很多,而且颜色较深。请问这可能是什么造成的,要怎样避免呢
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199006287956

木虫 (著名写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2014-09-17 22:09:11
搜索一下冯家勋的文章,该人做过宏基因组文库,文章里提了怎么纯化提取DNA的。

师兄好,现在还在广西发展?

[ 发自小木虫客户端 ]
追求不惜,奋斗不息
5楼2014-09-19 11:08:30
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查看全部 8 个回答

馨-馨

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你是手提的话,底泥里有大量的腐殖酸等物质,提取后很色很深,说明纯度不够,需要酚氯仿多抽提几次。当然,有条件的话,推荐用试剂盒提取。因为如果你的模板提取质量不高,后续的PCR等一系列实验会遇到很多问题。祝楼主实验顺利。
2楼2014-09-17 08:37:30
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a314919473

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
主要看你后续试验。
我们主要做DGGE,提取过程遇到这些情况很正常,可以考虑取500mg污泥,加入1ml的1xTE中,离心去上清,然后再加裂解液,如果DNA还是颜色很深,可以电泳后纯化,或者直接买个去腐殖酸的试剂盒,这个我们公司就有。
祝你成功
有你真好
3楼2014-09-17 14:12:54
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
搜索一下冯家勋的文章,该人做过宏基因组文库,文章里提了怎么纯化提取DNA的。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
4楼2014-09-17 22:09:11
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