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篮球蛤蟆

银虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 676.5
帖子: 33
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虫号: 430654
注册: 2007-08-11
专业: 生物

[交流] 求助：关于RT－PCR

手头有植物体细胞胚的总RNA，现在要做RT-PCR,想看能不能p出wus基因。请问引物怎么设计，有什么要求。哪位虫子能提供实验步骤，谢谢

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1楼 2008-04-20 15:53:48

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轻5飞扬

金虫 (正式写手)

应助: 3 (幼儿园)
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散金: 46
帖子: 605
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虫号: 186318
注册: 2006-02-16
专业: 发育生物学

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来

不会有什么特殊的吧
1,电泳检测总RNA没有问题,同时用分光做个定量(这个可以不做)
2,用invitrogen的反转Kit或别的Kit做反转,引物可以用CDSIII或是random primer,不过如果是要基因全长的话最好还是用CDSIII3
3,设计目的基因的两边的引物,将反转cDNA至少1:10稀释,然后取1作为模板做PCR,
4,扩出来后切胶回收,连接T载体,测序