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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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篮球蛤蟆

银虫 (初入文坛)

[交流] 求助:关于RT-PCR

手头有植物体细胞胚的总RNA,现在要做RT-PCR,想看能不能p出wus基因。请问引物怎么设计,有什么要求。哪位虫子能提供实验步骤,谢谢
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轻5飞扬

金虫 (正式写手)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
不会有什么特殊的吧
1,电泳检测总RNA没有问题,同时用分光做个定量(这个可以不做)
2,用invitrogen的反转Kit或别的Kit做反转,引物可以用CDSIII或是random primer,不过如果是要基因全长的话最好还是用CDSIII3
3,设计目的基因的两边的引物,将反转cDNA至少1:10稀释,然后取1作为模板做PCR,
4,扩出来后切胶回收,连接T载体,测序
2楼2008-04-20 20:35:29
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篮球蛤蟆

银虫 (初入文坛)

谢谢楼上的
3楼2008-04-26 15:52:39
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taishuai2004

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
引物和普同的PCR反应一样
反转录完成后 最好先用ACTIN基因检测一下反转录的质量
然后在P你的目的基因 这样把握会很大的啊
4楼2008-04-26 16:36:54
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篮球蛤蟆

银虫 (初入文坛)

谢谢,几天没上网了,刚看见
5楼2008-04-29 15:36:09
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cricketbaby

铜虫 (小有名气)

你好,能不能介绍一下有关RT-PCR方面的知识,我也要做这个东东,可是现在还没有入门。
6楼2008-06-20 15:30:57
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