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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助：关于RT－PCR
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篮球蛤蟆

银虫 (初入文坛)

[交流] 求助：关于RT－PCR

手头有植物体细胞胚的总RNA，现在要做RT-PCR,想看能不能p出wus基因。请问引物怎么设计，有什么要求。哪位虫子能提供实验步骤，谢谢
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1楼 2008-04-20 15:53:48
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轻5飞扬

金虫 (正式写手)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
不会有什么特殊的吧
1,电泳检测总RNA没有问题,同时用分光做个定量(这个可以不做)
2,用invitrogen的反转Kit或别的Kit做反转,引物可以用CDSIII或是random primer,不过如果是要基因全长的话最好还是用CDSIII3
3,设计目的基因的两边的引物,将反转cDNA至少1:10稀释,然后取1作为模板做PCR,
4,扩出来后切胶回收,连接T载体,测序
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2楼2008-04-20 20:35:29
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篮球蛤蟆

银虫 (初入文坛)
谢谢楼上的
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3楼2008-04-26 15:52:39
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taishuai2004

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
引物和普同的PCR反应一样
反转录完成后 最好先用ACTIN基因检测一下反转录的质量
然后在P你的目的基因 这样把握会很大的啊
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4楼2008-04-26 16:36:54
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篮球蛤蟆

银虫 (初入文坛)
谢谢，几天没上网了，刚看见
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5楼2008-04-29 15:36:09
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cricketbaby

铜虫 (小有名气)
你好，能不能介绍一下有关RT-PCR方面的知识，我也要做这个东东，可是现在还没有入门。
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6楼2008-06-20 15:30:57
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