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jjwhl

银虫 (正式写手)

[求助] 一般培养条件下,毕赤酵母表达原核基因酶蛋白,表达量会有多少mg? 已有1人参与

各位用毕赤酵母表达酶基因的虫友,在一般培养条件下,表达量会有多少mg/L?最近,毕赤酵母表达酶蛋白,SDS-PAGE电泳有目的条带,酶活测不到,超滤浓缩后可以测到,不知道是不是表达量太低的原因啊......!求各位虫友帮助
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jjwhl

银虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by laozuzunzhe at 2014-09-24 14:42:38
SDS-PAGE都能跑出来?
那说明
1、你看到的条带不是你的目标蛋白;
2、表达的目标蛋白没有活性。
至于表达量,这个可以在文献中查查,这个不重要

是可以跑出来,阴性对照没有。而且超滤浓缩后,可以明显测出来,所以考虑是不是表达量太低,从而酶蛋白浓度低,而测不到酶活
3楼2014-09-24 15:37:27
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laozuzunzhe

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

SDS-PAGE都能跑出来?
那说明
1、你看到的条带不是你的目标蛋白;
2、表达的目标蛋白没有活性。
至于表达量,这个可以在文献中查查,这个不重要
2楼2014-09-24 14:42:38
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laozuzunzhe

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by jjwhl at 2014-09-24 15:37:27
是可以跑出来,阴性对照没有。而且超滤浓缩后,可以明显测出来,所以考虑是不是表达量太低,从而酶蛋白浓度低,而测不到酶活...

电泳能跑出来,说明浓度不会太低的,所以考虑是不是表达的目标蛋白没有活性。
4楼2014-09-24 16:31:24
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江灵敏

新虫 (小有名气)

我也在做毕赤酵母表达,但是我的跑SDSPAGE没有目的蛋白,没有表达出来,求赐教一下,谢谢

发自小木虫Android客户端
5楼2018-04-17 23:22:06
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