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汕头大学海洋科学接受调剂
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mwangzhen

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于方法学验证-耐用性问题 已有4人参与

现在做的一个项目,做方法学验证-耐用性时遇到一些问题,请有经验的大神帮忙解答一下。
耐用性-是否:不同波长、不同流速、不同柱温、不同柱子、不同流动相PH(涉及到的话)、不同流动相比例(涉及到的话)都要做?
比如有关物质方法,
流动相A:甲醇-0.02mol/L戊烷磺酸钠的0.5%硫酸铵溶液(2M盐酸调pH至2.00)=10:90;
流动相B:甲醇;
流速1.0ml/min,进样量20μl,检测波长205nm;
色谱柱
柱温30℃
梯度设置:
时间min        流动相A        流动相B
0                 100                     0
25                 100                     0
35                 35                    65
55                35                    65
60                100                      0
70                100                0
问题:1.我的方法不耐用,调整比例和pH后,杂质可能分离度不好,是否必须做不同流动相PH、不同流动相比例,不做是否漏项
          2.做的话,结果不好,是否可以解释
          3.如果我的样品非常不稳定,耐用性如果计算杂质含量的话,做起来需要的时间比较长,是否可以有关物质耐用性,用加主成分的混标做各个条件,然后计算各条件下的相对保留时间和分离度(同事说见过这样做的)?
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mwangzhen

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by shen2003 at 2014-09-10 18:17:25
甲醇,你用205的波长合适么?
你觉得?

参考的BP方法里,是205nm,本来是等度的,即流动相为我上面的A相,我们自己优化的,所以也用了甲醇,用甲醇不合理是吗
14楼2014-09-11 11:52:19
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查看全部 17 个回答

XiaOliAngeR

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
mwangzhen: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-09-11 11:53:01
1、方法不耐用的更要做,对于结果不好的条件需要在方法里注明,比如:本方法需要严格控制pH、流动性比例。
2、同上
3、耐用性测试只要能够通过系统适用性即可,即主成分+混标溶液的分离度能达到要求,不需要多做去测出含量。
2楼2014-09-09 18:35:36
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mwangzhen

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by XiaOliAngeR at 2014-09-09 18:35:36
1、方法不耐用的更要做,对于结果不好的条件需要在方法里注明,比如:本方法需要严格控制pH、流动性比例。
2、同上
3、耐用性测试只要能够通过系统适用性即可,即主成分+混标溶液的分离度能达到要求,不需要多做去 ...

这个条件,本身是梯度洗脱,我需要调整比例吗?就是不同比例是否可以不做?
3楼2014-09-10 08:37:14
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voyager88

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
不同检测波长不用做,仅代表个人意见
微信公众号:Pharmaguider(药事纵横),主页:www.pharmaguider.cn
4楼2014-09-10 13:56:54
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