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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸杂交 » 两条互补的单链DNA（30bp)退火杂交
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Long-jiabao

新虫 (小有名气)

[求助] 两条互补的单链DNA（30bp)退火杂交已有3人参与

两条互补的单链DNA（30bp),等比例混合在buffer中，95度，5min,然后自然冷却到室温 ，我想问的是室温下要放置多久才能完全杂交。还有需要加多少镁离子浓度？
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1楼2014-09-09 15:57:52
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1057910381

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-09-09 19:36:50
25℃ at 5℃/min  退火就可以了
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2楼2014-09-09 16:42:26
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1057910381

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 夏至1990 at 2014-09-09 21:46:50
没分钟降5度，降14分钟，到25就行了，一般时间冲突我就会25度一直放着，吃完饭就做下一步，你是做cas9吗，相互交流吧...

对的，大家都做的Cas9吧，一般很好连得的，不会有问题的，放置室温1-2小时也就OK了
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7楼2014-09-10 10:41:42
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普通回帖

Long-jiabao

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 1057910381 at 2014-09-09 16:42:26
25℃ at 5℃/min  退火就可以了

哦  我想知道有没有做过就是95度5min的 要放置在25度多久
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3楼2014-09-09 19:30:28
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bio_sci

捐助贵宾 (正式写手)
同问，放多久

[ 发自小木虫客户端 ]
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4楼2014-09-09 20:16:17
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夏至1990

金虫 (小有名气)

小小虫
引用回帖:
2楼: Originally posted by 1057910381 at 2014-09-09 16:42:26
25℃ at 5℃/min  退火就可以了

你好，我的也是这样，但是在连接载体时候总是出现问题
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Sodoyouwanttotakealeapoffaith…orbecomeanoldman,filledwithregret…waitingtodiealone?
5楼2014-09-09 21:45:00
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夏至1990

金虫 (小有名气)

小小虫

【答案】应助回帖

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Long-jiabao: 金币+1 2014-09-09 22:02:49
Long-jiabao: 金币+1 2014-09-10 18:32:45
引用回帖:
3楼: Originally posted by Long-jiabao at 2014-09-09 19:30:28
哦  我想知道有没有做过就是95度5min的 要放置在25度多久...

没分钟降5度，降14分钟，到25就行了，一般时间冲突我就会25度一直放着，吃完饭就做下一步，你是做cas9吗，相互交流吧
赞一下 回复此楼
Sodoyouwanttotakealeapoffaith…orbecomeanoldman,filledwithregret…waitingtodiealone?
6楼2014-09-09 21:46:50
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1057910381

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 夏至1990 at 2014-09-09 21:45:00
你好，我的也是这样，但是在连接载体时候总是出现问题...

楼下说的就可以了
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8楼2014-09-10 10:42:05
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1057910381

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by bio_sci at 2014-09-09 20:16:17
同问，放多久

楼下说的就可以的，可以试试
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9楼2014-09-10 10:42:25
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1057910381

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Long-jiabao at 2014-09-09 19:30:28
哦  我想知道有没有做过就是95度5min的 要放置在25度多久...

看楼下哈
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10楼2014-09-10 10:42:38
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