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childchou

银虫 (小有名气)

[求助] 胶回收时跑不出条带 已有18人参与

小弟做基因克隆,PCR后跑电泳观察,上样量4ul,跑出的条带很亮,而且片段大小正确1000bp,然后进行胶回收,把4管PCR产物混一起,每个胶孔上样40ul,跑电泳后发现目的片段处没有条带,反而在100-200bp大小处出现很亮的条带,应该是引物二聚体,想请教下各位大神,这是为什么呀!用的染料是goldview,胶染法。急急急急急!!!!!
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boomshakalaka
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bwangel

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
childchou: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-09-09 16:48:45
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-09-10 08:45:55
我想很多人和我一样可能会错意了,楼主压根没做胶回收,而是先把PCR引物跑4微升,带正常,然后跑了40微升,就没带了是不,

如果这样的话,首先染料和电解液和PCR都没问题,因为这些东西你压根就没换,唯一的问题很可能是胶的问题,胶没做好基本是

有一楼说的对,别纠结了,反正都跑掉了,再重新PCR吧,这次把小孔和大孔的胶做一起,这样胶就不会出问题了,一般你小的能跑出来,大的也一定能跑出来
43楼2014-09-09 15:55:37
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tangjiguoice

木虫 (著名写手)


childchou(金币+1): 谢谢参与
得金币了,说声谢谢!
2楼2014-09-07 21:09:20
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childchou

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by tangjiguoice at 2014-09-07 21:09:20
得金币了,说声谢谢!

给点建议啊!亲
boomshakalaka
3楼2014-09-07 21:18:27
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人偶骑士

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-09-08 16:19:12
换EB试试,我之前用其它染色剂也出现了很多问题,换了EB就没了
道之所在,虽千万人吾往矣!
5楼2014-09-07 21:27:07
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