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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 连接 转化
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灰灰三打一

新虫 (初入文坛)

[求助] 连接 转化 已有3人参与

我在做原核表达，3个片段分别与pet28a载体连接 酶切位点用的bamh1与xhol1，用DH5a做转化，超过了16h 就是不长。 另外我用了pet28a质粒也一起做了转化，这个板子超过12h才长出来，感觉是15小时到16小时长出来的。 有没有高手帮我分析下该怎么做！！不尽感激
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灰灰三打一

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1楼 2014-09-07 18:22:52
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huyan0817

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
灰灰三打一(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-09-10 18:17:06
做转化一般15小时长的可以挑单克隆子!12小时可以看见长起来!像楼主这种情况最好做一个对照,就是转一个质粒来验证感受态细胞是否有问题~!如果没有问题,那么楼主腰考虑酶切是否彻底,连接体系是否合理以及抗生素的选择!
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6楼2014-09-10 15:04:07
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我欲乘风归去

木虫 (正式写手)
★
myprayer: 金币+1, 鼓励发帖积极交流。 2014-09-08 16:24:43
如果你转质粒12个小时都长不出来，说明你的感受态有些问题，最好重做或者买些商业的感受态。

做双酶切连接的注意事项请在本版搜索吧，主要是要注意摩尔比。
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。
2楼2014-09-08 09:12:58
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灰灰三打一

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 我欲乘风归去 at 2014-09-08 09:12:58
如果你转质粒12个小时都长不出来，说明你的感受态有些问题，最好重做或者买些商业的感受态。

做双酶切连接的注意事项请在本版搜索吧，主要是要注意摩尔比。

我买的是 商业感受态  ！
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3楼2014-09-10 13:53:31
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灰灰三打一

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 我欲乘风归去 at 2014-09-08 09:12:58
如果你转质粒12个小时都长不出来，说明你的感受态有些问题，最好重做或者买些商业的感受态。

做双酶切连接的注意事项请在本版搜索吧，主要是要注意摩尔比。

买的是商业感受态啊
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4楼2014-09-10 13:54:47
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