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macjr

银虫 (正式写手)

[求助] 植物叶片中可溶性蛋白质含量,紫外比色法测定 偏高?求原因 已有2人参与

植物叶片中可溶性蛋白质含量,紫外比色法测定,在260和280吸光度下,主要是偷懒了,最终测定的结果偏高很多,含量都达到200mg/g了,这个什么原因啊,我是用了0.5g的叶子,10ml提取液,然后取0.2ml加入5ml缓冲液,测定出的吸光度范围在0.3-0.6之间,换算出来的结果明显高于别人的研究,求原因。
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taojia7560

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
macjr: 金币+10 2014-09-10 17:31:59
引用回帖:
5楼: Originally posted by macjr at 2014-09-08 11:16:29
就是绿色的,但是在叶子的末端有点发红,就是感觉像是变黑了那种。。...

发红应该是含有花青素,花青素对270-290nm紫外光有强烈吸收,对你的比色结果就会产生影响。
平凡
7楼2014-09-08 22:56:07
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普通回帖

guoyu0731

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你用的什么方法?为什么测定260和280的吸光度呢?我的是在595nm
2楼2014-09-07 22:25:21
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taojia7560

木虫 (正式写手)

什么叶片?叶片纯绿色还是有点发红?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
平凡
3楼2014-09-08 08:00:34
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macjr

银虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by guoyu0731 at 2014-09-07 22:25:21
你用的什么方法?为什么测定260和280的吸光度呢?我的是在595nm

就是用紫外法,参照李合生的植物生理生化试验原理和技术这本书的,没有用考马斯亮蓝法做,用一个公式蛋白质浓度(mg/ml)=1.45A280-0.74A260,这个公式
4楼2014-09-08 11:15:39
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macjr

银虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by taojia7560 at 2014-09-08 08:00:34
什么叶片?叶片纯绿色还是有点发红?

就是绿色的,但是在叶子的末端有点发红,就是感觉像是变黑了那种。。
5楼2014-09-08 11:16:29
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guoyu0731

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by macjr at 2014-09-08 11:15:39
就是用紫外法,参照李合生的植物生理生化试验原理和技术这本书的,没有用考马斯亮蓝法做,用一个公式蛋白质浓度(mg/ml)=1.45A280-0.74A260,这个公式...

哦,是我孤陋寡闻了,紫外法是比较精确吗?
6楼2014-09-08 20:59:32
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mazhq1988

金虫 (正式写手)

偷懒了吧....
爱人者,人恒爱之;敬人者,人恒敬之;助人者,人恒助之
8楼2014-09-09 11:32:27
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macjr

银虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by taojia7560 at 2014-09-08 22:56:07
发红应该是含有花青素,花青素对270-290nm紫外光有强烈吸收,对你的比色结果就会产生影响。...

哦,明白了,谢谢啊。。偷懒过真不行啊。。如果我就单纯用260nm测定纯蛋白质的吸光度,做出标线,然后带入计算,这样能否行?
9楼2014-09-10 17:39:04
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macjr

银虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by mazhq1988 at 2014-09-09 11:32:27
偷懒了吧....

哎、、五个指标就两个人。。能偷懒就偷懒了。
10楼2014-09-10 17:39:30
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