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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求大神帮忙设计引物，急急急！！！
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dehong1573

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-09-10 09:20:42
楼上已经提到解决方法，表示赞同:1. 以没有酶切位点的PCR产物（稀释100倍）为模版重新PCR；2.直接TA克隆，将没有酶切位点的PCR产物（Taq酶）克隆T载体，然后亚克隆；3.摸索PCR条件
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科学永无止境,只有合作共享才能更好地……
11楼2014-09-07 08:15:05
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北化方华

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by jennifermatt at 2014-09-05 09:00:05
你是什么体系扩增？我以前用15ulP不出来，换25ul体系就批出来了。可以换一下体系。

我用的是25ul的呢
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12楼2014-09-09 14:59:20
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北化方华

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by lqx2006 at 2014-09-05 09:09:16
设计引物最重要的是没错误引发，两条引物的tm不超过5，如果引物特异性高，酶切位点影响就不怎么大了，当然，如果你的序列没什么保密性，可以内信我，我帮你从新设计

你的邮箱多少发给你
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13楼2014-09-09 15:00:05
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mushroom1993

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by lqx2006 at 2014-09-05 09:09:16
设计引物最重要的是没错误引发，两条引物的tm不超过5，如果引物特异性高，酶切位点影响就不怎么大了，当然，如果你的序列没什么保密性，可以内信我，我帮你从新设计

能帮我设计一下引物么？多酚氧化酶的，用于RT-PCR
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天道酬勤
14楼2014-11-21 22:05:24
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天地一微尘

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

先用不加酶切位点的引物扩增。以扩增后的产物为模板，再用加了酶切位点的引物来扩增试试。
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15楼2014-11-22 10:05:24
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