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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 蛋白偶联核酸的问题
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hbsdz

新虫 (小有名气)

[求助] 蛋白偶联核酸的问题 已有1人参与

我现在在做蛋白连接DNA，但总是连接不上，不知道在哪个地方出问题了，有没有哪位高人再做这方面的，希望可以指点一二，不甚感激！
具体，PH值9，硼氢化钠4mg/ml,。
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我的邮箱：hbsdzml@163.com
1楼 2014-09-03 20:32:39
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zhaolijunzlj

铜虫 (小有名气)
可以具体一点吗？你是准备怎么接，然后接不上去
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我的事情我做主
2楼2014-09-05 19:35:32
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hbsdz

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhaolijunzlj at 2014-09-05 19:35:32
可以具体一点吗？你是准备怎么接，然后接不上去

您好，我在DNA上标记醛基，然后利用醛基与蛋白上的氨基发生反应。但是，还不想让DNA上的氨基等基团与标记的醛基自身发生反应。顺便问您一下，您也做这方面的实验吗？希望可以深入交流一下，非常感谢！
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我的邮箱：hbsdzml@163.com
3楼2014-09-05 19:55:12
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zhaolijunzlj

铜虫 (小有名气)
★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-11-04 12:47:13
引用回帖:
3楼: Originally posted by hbsdz at 2014-09-05 19:55:12
您好，我在DNA上标记醛基，然后利用醛基与蛋白上的氨基发生反应。但是，还不想让DNA上的氨基等基团与标记的醛基自身发生反应。顺便问您一下，您也做这方面的实验吗？希望可以深入交流一下，非常感谢！...

哈哈，我以前是做有机的，现在也转战生物分析这块，也是刚刚接触，不过感觉在生物条件下，要防止DNA本身的氨基与醛基反应是有点难的，找找能不能对蛋白上的氨基进行下活化，然后估计就可以解决这个问题了，具体的氨基活化方法你在查一下，以前见过的
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我的事情我做主
4楼2014-09-05 20:06:41
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zhaolijunzlj

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by hbsdz at 2014-09-05 19:55:12
您好，我在DNA上标记醛基，然后利用醛基与蛋白上的氨基发生反应。但是，还不想让DNA上的氨基等基团与标记的醛基自身发生反应。顺便问您一下，您也做这方面的实验吗？希望可以深入交流一下，非常感谢！...

顺便问一下，你是哪个学校的呢？
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我的事情我做主
5楼2014-09-05 20:07:48
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hejian66

荣誉版主 (文坛精英)

优秀版主
这个比较困难,空间位阻较大,其次氨基酸中胺的亲核性不是很高,估计你得需要一些催化剂。其次建议你详查一下文献,相关的报道多关注一下

[ 发自小木虫客户端 ]
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6楼2014-11-03 21:00:04
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hbsdz

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by hejian66 at 2014-11-03 21:00:04
这个比较困难,空间位阻较大,其次氨基酸中胺的亲核性不是很高,估计你得需要一些催化剂。其次建议你详查一下文献,相关的报道多关注一下

谢谢，我在找找其他条件，看看可不可以吧！非常感谢你的建议！
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我的邮箱：hbsdzml@163.com
7楼2014-11-04 16:46:38
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人

【答案】应助回帖

这个反应用于蛋白偶联一般非常慢，要4个小时以上
还有一般都是用NaB(CN)H3 不用NaBH4 我也不知道为什么
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
8楼2014-11-05 03:35:45
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hbsdz

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2014-11-05 03:35:45
这个反应用于蛋白偶联一般非常慢，要4个小时以上
还有一般都是用NaB(CN)H3 不用NaBH4 我也不知道为什么

非常感谢！我现在已经不再自己直接接了常，我买了胶联剂，现在直接胶联就可以了！非常感谢你的建议！谢谢！如果后续工作要接，我一定试试！

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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我的邮箱：hbsdzml@163.com
9楼2014-11-05 06:54:05
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ly889264

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by hbsdz at 2014-11-05 06:54:05
非常感谢！我现在已经不再自己直接接了常，我买了胶联剂，现在直接胶联就可以了！非常感谢你的建议！谢谢！如果后续工作要接，我一定试试！
...

你好！能问一下你用的什么交联剂？最近也需要将DNA偶联到蛋白上，谢谢了
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永不背弃，永不放弃
10楼2016-02-13 06:09:47
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