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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 电化学 » 电化学传感器 » 求助指点HRP-TMB电化学体系的相关问题
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西交田苗

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助指点HRP-TMB电化学体系的相关问题 已有1人参与

我在做电化学检测，用的体系是HRP-TMB体系，先将HRP捕获在电极表面，然后在TMB-H2O2底物溶液中进行计时电流检测，实验过程中遇到很多问题，希望做过的前辈分析指点。
1.电化学中的TMB-H2O2的配方是否与比色检测中的配方一样？我使用的配方为TMB（1mg/mL,DMSO）:缓冲液（0.1M柠檬酸，0.2M磷酸氢二钠，pH4.9）：H2O2（30%）=100:900:1，但我看近些年发表的利用TMB-H2O2进行电化学检测的比较高档的文章基本都用的是Neogen公司的K-bule低活性底物溶液（含H2O2），不知道这跟自己配的有什么区别？
2.实验中，我是将3uL 0.5U/mL的HRP滴加到电极上，捕获之后冲洗，然后将电极浸入到TMB-H2O2底物中进行检测。所以检测之前我先对HRP与该底物溶液之间的反应进行了评估，即将3uL 0.5U/mL的HRP直接加入到底物溶液中进行测量，但是产生的电流非常小（40nA）左右，这比文献中的检测背景电流还要低，而且我将HRP的量提高到两三倍时，电流值并没有升高，提高到100倍时，电流值才升高了几倍（但产生的颜色随着HRP的增强而变深，可以排除HRP活性的问题），请问这有可能是什么原因造成的？
3.HRP加入到底物中后需要反应一段时间再进行电流测试还是立即测试？底物是一次性的还是可以重复进行多次电流测试？
4.进行电化学检测之后底物溶液应该是蓝色还是无色？
希望大家不吝赐教，非常感谢！！
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1楼 2014-09-03 10:29:29
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linlinxixi

金虫 (小有名气)
楼主，你好！我也在做HRP-TMB这个体系，遇到了跟你同样的问题，不知道你的问题解决了没？
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2楼2014-11-27 20:03:56
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labinnah

金虫 (正式写手)
同样的问题，楼主之前的经验能分享下吗？
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3楼2018-05-04 08:35:08
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张文芬的

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by labinnah at 2018-05-04 08:35:08
同样的问题，楼主之前的经验能分享下吗？

同样的问题，不知道楼主解决了吗?是否可以分享一下
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4楼2018-11-19 04:27:58
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114110050

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

电化学检测之后底物溶液应该是蓝色的
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5楼2019-05-14 19:29:29
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