| 查看: 1058 | 回复: 16 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
hongkaichen金虫 (小有名气)
|
[交流]
求助，关于DNA提取问题。
|
||
|
我想问下，我用CTAB法提取真菌DNA（菇类，还有一些其他的真菌）提出的带经常是好长的尾巴，但要的DNA好像没有。 我的CATB法是这样的，先用液氮研磨（菇类的不好研）有时也用烘干后研磨的粉末，然后加入预热的CTAB缓冲液（用粉末的时候还加入过蛋白酶K，用液氮研磨的时候也加过），65度水浴30分钟，有时也水浴过2个小时或更长时间，然后就是12000g离心5分钟，取上清加入等体积的氯仿：异戊醇（24：1），有时也直接用氯仿提，再12000g离心5分钟，取上清，重复上一步2-3次，直到没有蛋白质为止，然后加入2倍体积的乙醇和1/10体积的醋酸铵（由于没有醋酸铵加的是），静置10分钟，12000g离心10分钟，弃上清，用百分之70的乙醇清洗 ，再用TE溶解，再跑电泳，跑出来的带如图，有一次担到了但杂质特多，希望哪位好人能帮忙解释下！！谢谢！！ [ Last edited by hongkaichen on 2008-4-18 at 18:09 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
面上5B能上会吗？
已经有4人回复
-
329求调剂，一志愿西北工业大学，材料工程（085601）
已经有9人回复
-
322求调剂：一志愿湖南大学 材料与化工（085600），已过六级。
已经有4人回复
-
085600 材料与化工 329分求调剂
已经有14人回复
-
材料科学与工程求调剂
已经有3人回复
-
289求调剂
已经有5人回复
-
化学工程085602 305分求调剂
已经有21人回复
-
26申博自荐
已经有5人回复
-
296求调剂
已经有5人回复
-
总分293求调剂
已经有10人回复
hfztim
至尊木虫 (正式写手)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 24022.3
- 散金: 291
- 红花: 33
- 帖子: 783
- 在线: 95.9小时
- 虫号: 287965
- 注册: 2006-10-21
- 性别: MM
- 专业: 抗体工程学
|
真菌基因组DNA的长度在几十到几百kb左右不等，从你电泳图可以看出DNA碎片太多，左边加样孔的样品里可能有糖类等残留物质。见议：1.你用λ-DNA做MARKER 2.提取时动作要温柔 3. 第一次看到絮状沉淀时用牙签挑取DNA，最好不要通过离心得到DNA(可能有一些多糖也一起沉淀了)，再进行后续的纯化。 给你一个方法作为参考： 1.液氮研碎，加CTAB缓冲液，60度1小时以上。 2.加等体积酚、氯仿，10000rpm 5min 3.上清加2/3体积异丙醇，12000rpm 5min 4.沉淀加含RNA酶的TE 37度溶解半小时 5.用等体积酚、氯仿，12000rpm 5min 用等体积氯仿，12000rpm 5min 6.加1/10体积乙酸钠，两倍无水乙醇，12000rpm 5min 7.沉淀用75%乙醇洗，溶解即可。 [ Last edited by hfztim on 2008-4-18 at 11:46 ] |
8楼2008-04-18 11:44:14
skkyy88888
铜虫 (著名写手)
- 应助: 5 (幼儿园)
- 金币: 142
- 散金: 1521
- 红花: 1
- 沙发: 1
- 帖子: 2340
- 在线: 216.2小时
- 虫号: 277762
- 注册: 2006-09-09
- 专业: 生物化学
2楼2008-04-17 14:47:03
3楼2008-04-17 15:24:40
hongkaichen
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 801.7
- 帖子: 136
- 在线: 22.2小时
- 虫号: 168376
- 注册: 2006-01-16
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
4楼2008-04-17 23:37:50
