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hongkaichen

金虫 (小有名气)

[交流] 求助,关于DNA提取问题。

我想问下,我用CTAB法提取真菌DNA(菇类,还有一些其他的真菌)提出的带经常是好长的尾巴,但要的DNA好像没有。
     我的CATB法是这样的,先用液氮研磨(菇类的不好研)有时也用烘干后研磨的粉末,然后加入预热的CTAB缓冲液(用粉末的时候还加入过蛋白酶K,用液氮研磨的时候也加过),65度水浴30分钟,有时也水浴过2个小时或更长时间,然后就是12000g离心5分钟,取上清加入等体积的氯仿:异戊醇(24:1),有时也直接用氯仿提,再12000g离心5分钟,取上清,重复上一步2-3次,直到没有蛋白质为止,然后加入2倍体积的乙醇和1/10体积的醋酸铵(由于没有醋酸铵加的是),静置10分钟,12000g离心10分钟,弃上清,用百分之70的乙醇清洗 ,再用TE溶解,再跑电泳,跑出来的带如图,有一次担到了但杂质特多,希望哪位好人能帮忙解释下!!谢谢!!


[ Last edited by hongkaichen on 2008-4-18 at 18:09 ]
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hongkaichen

金虫 (小有名气)

恩,是没加RNAse,虽然没加RNAse,但如果有DNA的话在孔的地方应该也有一条比较明显的带的,我再细心的提下看,谢谢各位!
4楼2008-04-17 23:37:50
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查看全部 17 个回答

skkyy88888

铜虫 (著名写手)

加RNAse了吗?
2楼2008-04-17 14:47:03
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moonfaceout

铜虫 (初入文坛)

建议水浴后,开始离心转速不要太高,冷冻离心机上一般8000转左右就行
(我们用的是eppendorf)。第一次沉淀用异丙醇-20沉淀效果应该好一些。
看图,你应该是没除RNA,材料最好用新鲜的。试试看看吧。
3楼2008-04-17 15:24:40
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showzoo

银虫 (小有名气)

加大样品量。磨的时候会损失不少的,碾磨的东西也可以改进一下,我们是用一个玻璃棒磨成EP管的形状进行磨的。还有用RNA酶处理一下
5楼2008-04-18 09:55:45
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