| 查看: 4854 | 回复: 40 | ||||||
| 本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | ||||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||||||
阿修罗Axuro金虫 (小有名气)
|
[交流]
十分诡异的电泳问题，已经解决，分享给大家。 已有37人参与
|
|||||
|
前几天发了个帖，对于十分诡异的电泳问题的，现在已经解决，找到问题了。 首先，我在那个帖子里一开始就说过了，我做过四年胶了，从来没出过问题。 我也做过各种尝试变换，问题依然没有解决。很多回复的人都把这个问题想得很常规。但是四年做胶经验各种尝试都没解决，应该知道并不是常规的问题。 昨天有一个虫子 @ssssllllnnnn 认为是marker严重过量，建议减少量，做个依次梯度。按建议做完后，发现减少到0.5ul时确实条带比较好了。但是问题随之而来了： 一，marker的说明书建议加5ul，为何5ul会不行？而需要减少到0.5ul。 二，虫子我这四年来，做胶都是加5ul，有时候甚至随手加到10ul，从未出过问题，为何现在5ul不行了？ 三，0.5ul虽然条带比较好，但是根本不能实际应用，因为亮度太弱，如果曝光时间延迟，则PCR产物条带就成了一条巨粗无比的带。 那么这里面肯定有蹊跷。于是我决定把胶切开看看，一探究竟，先横向切开，观察加样孔，发现加样孔十分平滑，毫无问题。 然后纵向切开，用紫外灯照着，观察条带。有了很重要的发现：纵向来看，Marker的条带并不是垂直的一条线，而是弯的。具体见第一张图的示意。由于电泳的条 带在纵向上不是一条垂直线，当我们从上往下观察电泳胶的时候，我们看到的条带就会比较宽的，这样就会形成重叠和拖尾严重的现象。 而减少Marker的量，由于Marker少了，并没有把整个纵向填满，当Marker越少，就填得越低，这样我们看到的条带就越细，这样减少Marker就能获得比较正常而又清晰的条带。但是减少Marker并没有解决我的实验的问题。  上面部分只是解释了这些现象，为什么会这样呢？当我看到我的胶的纵切图的时候，我马上就反应过来了：很明显，胶不均匀，纵向来讲上部分浓度较大，而下部分浓度低，这样上面的DNA跑得慢，下面的跑得快，就形成了这个现象。 想到这里，我马上想到了一个问题：我们做胶和电泳一直是在通风橱里面做，由于我们这栋楼是豆腐渣工程，一直以来，通风橱都是个摆设：没有风。由于很多老师实验要求，几个月前，院里把通风橱的风道修好了，有风了！！！这样再在通风橱里面做胶的话，风比较大，使胶的表面的水分流失很快。这样就导致胶的表面部分浓度较高，而胶下部分浓度变化不大。 想完后，今天马上动手，在通风橱外面做了一块胶，果然不出所料，问题解决了。5ulmarker依然没有问题。见附图二。   20140828.jpg |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 分子生化实验经验积累 | 生工检测理论与实务 | 前人经验 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
怎么都行» 猜你喜欢
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有101人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
化工申博
已经有3人回复
-
申博自荐
已经有2人回复
-
广西民族大学化学化工学院化学工程与技术学硕，材料化工专硕调剂名额充足！
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 诡异的RNA电泳图，求分析
已经有9人回复
loong13
木虫 (著名写手)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 5557.9
- 红花: 2
- 帖子: 1027
- 在线: 101.5小时
- 虫号: 1057231
- 注册: 2010-07-14
- 专业: 职业卫生
10楼2014-08-28 23:45:40
cxjzly2008
木虫之王 (文学泰斗)
- 应助: 87 (初中生)
- 贵宾: 0.101
- 金币: 106654
- 红花: 116
- 沙发: 451
- 帖子: 59050
- 在线: 4368.1小时
- 虫号: 1452197
- 注册: 2011-10-20
- 专业: 药物化学
2楼2014-08-28 15:16:24
阿修罗Axuro
金虫 (小有名气)
- MolEPI: 2
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1091.5
- 散金: 17
- 红花: 4
- 帖子: 210
- 在线: 107.9小时
- 虫号: 1097468
- 注册: 2010-09-13
- 专业: 药物分析
3楼2014-08-28 15:19:31
鬼羽帝魂
木虫 (著名写手)
- 应助: 183 (高中生)
- 金币: 3100.2
- 散金: 19
- 红花: 12
- 帖子: 1427
- 在线: 186.8小时
- 虫号: 2538789
- 注册: 2013-07-09
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
4楼2014-08-28 16:04:05
