24小时热门版块排行榜

>论坛更新日志 (4436)
>导师招生 (370)
>休闲灌水 (231)
>虫友互识 (182)
>文献求助 (162)
>招聘信息布告栏 (149)
>论文道贺祈福 (122)
>硕博家园 (117)
>考博 (71)
>考研 (69)
>博后之家 (56)
>找工作 (56)
>基金申请 (50)
>教师之家 (31)
>生物科学 (29)
>论文投稿 (28)

返回列表

本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

阿修罗Axuro

金虫 (小有名气)

MolEPI: 2
应助: 1 (幼儿园)
金币: 1091.5
散金: 17
红花: 4
帖子: 210
在线: 107.9小时
虫号: 1097468
注册: 2010-09-13
专业: 药物分析

[交流] 十分诡异的电泳问题，已经解决，分享给大家。已有37人参与

前几天发了个帖，对于十分诡异的电泳问题的，现在已经解决，找到问题了。

首先，我在那个帖子里一开始就说过了，我做过四年胶了，从来没出过问题。  我也做过各种尝试变换，问题依然没有解决。很多回复的人都把这个问题想得很常规。但是四年做胶经验各种尝试都没解决，应该知道并不是常规的问题。

昨天有一个虫子  @ssssllllnnnn  认为是marker严重过量，建议减少量，做个依次梯度。按建议做完后，发现减少到0.5ul时确实条带比较好了。但是问题随之而来了：
一，marker的说明书建议加5ul，为何5ul会不行？而需要减少到0.5ul。
二，虫子我这四年来，做胶都是加5ul，有时候甚至随手加到10ul，从未出过问题，为何现在5ul不行了？
三，0.5ul虽然条带比较好，但是根本不能实际应用，因为亮度太弱，如果曝光时间延迟，则PCR产物条带就成了一条巨粗无比的带。

      那么这里面肯定有蹊跷。于是我决定把胶切开看看，一探究竟，先横向切开，观察加样孔，发现加样孔十分平滑，毫无问题。
      然后纵向切开，用紫外灯照着，观察条带。有了很重要的发现：纵向来看，Marker的条带并不是垂直的一条线，而是弯的。具体见第一张图的示意。由于电泳的条带在纵向上不是一条垂直线，当我们从上往下观察电泳胶的时候，我们看到的条带就会比较宽的，这样就会形成重叠和拖尾严重的现象。
      而减少Marker的量，由于Marker少了，并没有把整个纵向填满，当Marker越少，就填得越低，这样我们看到的条带就越细，这样减少Marker就能获得比较正常而又清晰的条带。但是减少Marker并没有解决我的实验的问题。

   上面部分只是解释了这些现象，为什么会这样呢？当我看到我的胶的纵切图的时候，我马上就反应过来了：很明显，胶不均匀，纵向来讲上部分浓度较大，而下部分浓度低，这样上面的DNA跑得慢，下面的跑得快，就形成了这个现象。

   想到这里，我马上想到了一个问题：我们做胶和电泳一直是在通风橱里面做，由于我们这栋楼是豆腐渣工程，一直以来，通风橱都是个摆设：没有风。由于很多老师实验要求，几个月前，院里把通风橱的风道修好了，有风了！！！这样再在通风橱里面做胶的话，风比较大，使胶的表面的水分流失很快。这样就导致胶的表面部分浓度较高，而胶下部分浓度变化不大。

   想完后，今天马上动手，在通风橱外面做了一块胶，果然不出所料，问题解决了。5ulmarker依然没有问题。见附图二。