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玉砌的强

金虫 (正式写手)

[求助] 怎样用比浊法对灰霉菌孢子进行计数??? 已有2人参与

看有文献上说是在560nm下进行比色计数,但也有说在600nm或420nm下进行计数的,另外请高手指点怎样制作用比浊法对灰霉菌孢子计数的标准曲线。谢谢!
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帖航

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
玉砌的强: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-08-28 19:08:38
先选定一个菌的最大吸光值,一般就是560,你可以参考其他OD值,然后将你的菌液做连续等梯度稀释,然后每一个稀释度下的菌液测吸光值并且用血球计数版计数,这样可以得到一条菌数-OD曲线,以后可以直接测菌液的OD值,然后带到你做的曲线里得出菌数
2楼2014-08-28 14:31:24
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小符啦啦

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
酵母菌是560,选择600大多是细菌,有文献报道真菌的可以参照酵母和霉菌,不过我建议还是要全波长扫描一下确定波长,然后再用OD值测

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
3楼2014-08-28 18:57:43
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玉砌的强

金虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 小符啦啦 at 2014-08-28 18:57:43
酵母菌是560,选择600大多是细菌,有文献报道真菌的可以参照酵母和霉菌,不过我建议还是要全波长扫描一下确定波长,然后再用OD值测

怎样进行全波长扫描啊,我是研一小硕,刚来实验室没几天,不懂这个,请高手赐教。
从心开始,从新开始......
4楼2014-08-28 19:10:09
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玉砌的强

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 帖航 at 2014-08-28 14:31:24
先选定一个菌的最大吸光值,一般就是560,你可以参考其他OD值,然后将你的菌液做连续等梯度稀释,然后每一个稀释度下的菌液测吸光值并且用血球计数版计数,这样可以得到一条菌数-OD曲线,以后可以直接测菌液的OD值, ...

我看有篇文章《真菌孢子三种计数方法相关性的探讨》里的方法是对黑曲霉、白地霉、康宁木霉的孢子用比浊法计数是在560nm下进行的,我前天也试着做了一次,结果不是很好。
从心开始,从新开始......
5楼2014-08-28 19:14:45
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小符啦啦

银虫 (初入文坛)

用紫外分光光度计测量,不过测的时候要迅速吧,因为我觉得孢子容易沉下去

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
6楼2014-08-28 19:44:29
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玉砌的强

金虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 小符啦啦 at 2014-08-28 19:44:29
用紫外分光光度计测量,不过测的时候要迅速吧,因为我觉得孢子容易沉下去

我前天用实验室的酶标仪测的,吸光度很低,估计是孢子沉下去了吧,下次再做的时候加过阳我再用移枪吹吹。
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7楼2014-08-28 20:10:49
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帖航

银虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 玉砌的强 at 2014-08-28 19:14:45
我看有篇文章《真菌孢子三种计数方法相关性的探讨》里的方法是对黑曲霉、白地霉、康宁木霉的孢子用比浊法计数是在560nm下进行的,我前天也试着做了一次,结果不是很好。...

全波长扫描要看仪器,如果仪器有全波长扫描就可以,如果没有,要用最原始的方法,非常耗时。比如你扫可见光区段,就是扫280nm下的OD,然后扫281nm下OD,再扫282nm......一直扫到800nm,然后波长对OD作图,找出最大吸光值。还有你用酶标仪侧,用的是比色皿还是96/48孔板,比色皿的厚度是1cm,48孔板加1ml样,厚度差不多是1cm。而且用比色皿和酶标板的光路是不一样的
8楼2014-08-29 09:39:08
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玉砌的强

金虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 帖航 at 2014-08-29 09:39:08
全波长扫描要看仪器,如果仪器有全波长扫描就可以,如果没有,要用最原始的方法,非常耗时。比如你扫可见光区段,就是扫280nm下的OD,然后扫281nm下OD,再扫282nm......一直扫到800nm,然后波长对OD作图,找出最大 ...

我用的是96孔板,加样200ul,在560nm 下测孢子浓度为1X10的8次方的孢子悬液的OD值为0.1346,感觉很低。如果做全波长扫描,是不是最大吸收峰对应的波长即为灰霉菌孢子悬液的最适波长啊?
从心开始,从新开始......
9楼2014-08-29 11:02:09
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帖航

银虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 玉砌的强 at 2014-08-29 11:02:09
我用的是96孔板,加样200ul,在560nm 下测孢子浓度为1X10的8次方的孢子悬液的OD值为0.1346,感觉很低。如果做全波长扫描,是不是最大吸收峰对应的波长即为灰霉菌孢子悬液的最适波长啊?...

对,OD值低就加大菌液的浓度,96孔板很方便测得,你直接测10^0,10^1,10^2.。。。。。一直到10^8不就行了,做三组平行,酶标仪测一下2分钟曲线就出来了,OD值不要大于2

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10楼2014-08-29 15:19:16
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