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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 怎样用比浊法对灰霉菌孢子进行计数？？？
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玉砌的强

金虫 (正式写手)

[求助] 怎样用比浊法对灰霉菌孢子进行计数？？？已有2人参与

看有文献上说是在560nm下进行比色计数，但也有说在600nm或420nm下进行计数的，另外请高手指点怎样制作用比浊法对灰霉菌孢子计数的标准曲线。谢谢！
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从心开始，从新开始......
1楼2014-08-28 08:30:40
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帖航

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
玉砌的强: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-08-28 19:08:38
先选定一个菌的最大吸光值，一般就是560，你可以参考其他OD值，然后将你的菌液做连续等梯度稀释，然后每一个稀释度下的菌液测吸光值并且用血球计数版计数，这样可以得到一条菌数-OD曲线，以后可以直接测菌液的OD值，然后带到你做的曲线里得出菌数
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2楼2014-08-28 14:31:24
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小符啦啦

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
酵母菌是560，选择600大多是细菌，有文献报道真菌的可以参照酵母和霉菌，不过我建议还是要全波长扫描一下确定波长，然后再用OD值测

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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3楼2014-08-28 18:57:43
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玉砌的强

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 小符啦啦 at 2014-08-28 18:57:43
酵母菌是560，选择600大多是细菌，有文献报道真菌的可以参照酵母和霉菌，不过我建议还是要全波长扫描一下确定波长，然后再用OD值测

怎样进行全波长扫描啊，我是研一小硕，刚来实验室没几天，不懂这个，请高手赐教。
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从心开始，从新开始......
4楼2014-08-28 19:10:09
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玉砌的强

金虫 (正式写手)
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2楼: Originally posted by 帖航 at 2014-08-28 14:31:24
先选定一个菌的最大吸光值，一般就是560，你可以参考其他OD值，然后将你的菌液做连续等梯度稀释，然后每一个稀释度下的菌液测吸光值并且用血球计数版计数，这样可以得到一条菌数-OD曲线，以后可以直接测菌液的OD值， ...

我看有篇文章《真菌孢子三种计数方法相关性的探讨》里的方法是对黑曲霉、白地霉、康宁木霉的孢子用比浊法计数是在560nm下进行的，我前天也试着做了一次，结果不是很好。
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5楼2014-08-28 19:14:45
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小符啦啦

银虫 (初入文坛)
用紫外分光光度计测量，不过测的时候要迅速吧，因为我觉得孢子容易沉下去

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6楼2014-08-28 19:44:29
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玉砌的强

金虫 (正式写手)
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6楼: Originally posted by 小符啦啦 at 2014-08-28 19:44:29
用紫外分光光度计测量，不过测的时候要迅速吧，因为我觉得孢子容易沉下去

我前天用实验室的酶标仪测的，吸光度很低，估计是孢子沉下去了吧，下次再做的时候加过阳我再用移枪吹吹。
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7楼2014-08-28 20:10:49
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帖航

银虫 (小有名气)
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5楼: Originally posted by 玉砌的强 at 2014-08-28 19:14:45
我看有篇文章《真菌孢子三种计数方法相关性的探讨》里的方法是对黑曲霉、白地霉、康宁木霉的孢子用比浊法计数是在560nm下进行的，我前天也试着做了一次，结果不是很好。...

全波长扫描要看仪器，如果仪器有全波长扫描就可以，如果没有，要用最原始的方法，非常耗时。比如你扫可见光区段，就是扫280nm下的OD，然后扫281nm下OD，再扫282nm......一直扫到800nm，然后波长对OD作图，找出最大吸光值。还有你用酶标仪侧，用的是比色皿还是96/48孔板，比色皿的厚度是1cm，48孔板加1ml样，厚度差不多是1cm。而且用比色皿和酶标板的光路是不一样的
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8楼2014-08-29 09:39:08
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玉砌的强

金虫 (正式写手)
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8楼: Originally posted by 帖航 at 2014-08-29 09:39:08
全波长扫描要看仪器，如果仪器有全波长扫描就可以，如果没有，要用最原始的方法，非常耗时。比如你扫可见光区段，就是扫280nm下的OD，然后扫281nm下OD，再扫282nm......一直扫到800nm，然后波长对OD作图，找出最大 ...

我用的是96孔板，加样200ul，在560nm 下测孢子浓度为1X10的8次方的孢子悬液的OD值为0.1346，感觉很低。如果做全波长扫描，是不是最大吸收峰对应的波长即为灰霉菌孢子悬液的最适波长啊？
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9楼2014-08-29 11:02:09
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帖航

银虫 (小有名气)
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9楼: Originally posted by 玉砌的强 at 2014-08-29 11:02:09
我用的是96孔板，加样200ul，在560nm 下测孢子浓度为1X10的8次方的孢子悬液的OD值为0.1346，感觉很低。如果做全波长扫描，是不是最大吸收峰对应的波长即为灰霉菌孢子悬液的最适波长啊？...

对，OD值低就加大菌液的浓度，96孔板很方便测得，你直接测10^0,10^1,10^2.。。。。。一直到10^8不就行了，做三组平行，酶标仪测一下2分钟曲线就出来了，OD值不要大于2
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玉砌的强
10楼2014-08-29 15:19:16
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