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1楼2014-08-27 10:12:50

hihe99

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10楼: Originally posted by zans2009 at 2014-08-27 20:39:31
因为是第一次做这方面的工作，有些还不是很明白。
电泳出现无单一的条带，不知道是否是因为没有纯化好。
在真菌鉴定中，用ITS做PCR出现5kb的非特异条带的情况普遍吗？貌似文献中没有提及非特异条带的问题。...

我做过个1600的，是正确的，也有报道，你的5000也可能是正确的，仅供参考

12楼2014-08-28 13:47:00

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zans2009

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对了，25ul体系，PCR时引物加1ul、DNA加3ul。

2楼2014-08-27 10:19:16

huyan0817

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【答案】应助回帖

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zans2009(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-27 19:14:35

引用回帖:

2楼: Originally posted by zans2009 at 2014-08-27 10:19:16
对了，25ul体系，PCR时引物加1ul、DNA加3ul。

DNA模板太多了,可以稀释20-50倍加1ul！另外不知道楼主的目的是什么，只从电泳图看，1号2号P的挺好，不存在弥散条带，胶回收下就好了，没问题。3号4号条带多说明你的引物出现了非特异性扩增，毕竟你用的通用引物这个很正常，只要有你想要的目的片断就可以了，胶回收就可以了！

3楼2014-08-27 11:03:15

zans2009

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3楼: Originally posted by huyan0817 at 2014-08-27 11:03:15
DNA模板太多了,可以稀释20-50倍加1ul！另外不知道楼主的目的是什么，只从电泳图看，1号2号P的挺好，不存在弥散条带，胶回收下就好了，没问题。3号4号条带多说明你的引物出现了非特异性扩增，毕竟你用的通用引物这个 ...

我筛出4种真菌，做PCR是打算胶回收后测序做鉴定的，用its通用引物P出真菌的its2序列应该是500bp左右吧。现在3、4号出现5kb的条带，而且500bp处的条带不如1、2号那么明显，心里没谱了

4楼2014-08-27 11:46:22