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阿修罗Axuro

金虫 (小有名气)

[求助] 十分诡异的电泳问题,困扰太久了,求各位帮忙 已有8人参与

虫子我做DNA电泳接近4年了,从来没失过手,大家可能会想这是一个很简单的实验,怎么会有问题呢?我也是这么想的。所以我师妹出了问题后,我以为很简单就能解决,谁料我亲自上阵,搞了好久问题依旧。真是一世英名毁于这个入门实验手上,晚节不保啊!这不想起了小木虫,特来求助。

言归正传:问题:见图片,不管怎么跑,MARKER都是这个鬼样子,一开始还只有低于500BP的marker出现这样的情况,后面越来越严重,所有的都这样了。

那么问题很简单,我当然不会简单的就来求助,我尝试过哪些解决办法呢?

    一,换电泳Buffer。对师妹不放心,亲自配置新鲜的Buffer,问题依旧。
    二,新买Marker。 这换了Buffer没用,难道Mraker太久了,出问题了?买了俩支新Mraker,一支takara的,一支fermentas的。问题依旧。
    三,新买琼脂糖。 没办法,怀疑琼脂糖有问题,新买了一瓶BIOWEST的琼脂糖。问题依旧。
    四,新买染料。 我们实验室用的是Biotum的gelred,买了大概有大半年了,怀疑染料出了问题,买一支新的。问题依旧。
    五,换电泳仪。 难道电泳仪老化,电压不稳?换另一个一直在跑蛋白偶尔也跑跑中性PAGE的电泳仪(一直正常运行)。问题依旧。
   
神啊,都换得差不多了,还是老样子,这可如何是好?  难道是我加热的姿势不对?微波炉加热和电磁炉加热会有区别吗?明天试试。

十分诡异的电泳问题,困扰太久了,求各位帮忙
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ssssllllnnnn

至尊木虫 (知名作家)

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【答案】应助回帖

引用回帖:
20楼: Originally posted by 阿修罗Axuro at 2014-08-26 20:11:22
我没有火气大,是看你回答问题如此马虎,marker严重超标会很亮,你看我的marker的亮度就应该知道没有严重超标。marker我按说明书上的5ul...

下次,也许是今天,再跑的时候用1ul或更少试试看。
或者专门跑个marker,取5 ul稀释至50ul,然后一次上样10、5、2.5、1ul,然后把照片发上来看看。

亮是一回事,难道你没看到你的bands都很胖吗?都突到两侧了,这不是超量是什么?
22楼2014-08-27 09:24:02
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独身行天下

金虫 (小有名气)

会不会是琼脂糖浓度问题?

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-08-26 20:26:35
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莫伊2013

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
阿修罗Axuro(youlinglyw代发): 金币+5, 赠人玫瑰手有余香,生物科学有你更精彩! 2014-08-28 17:41:28
是不是水被污染了,配BUFFER的水被污染,或者装BUFFER的瓶子被污染了
3楼2014-08-26 20:28:35
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阿修罗Axuro

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 莫伊2013 at 2014-08-26 20:28:35
是不是水被污染了,配BUFFER的水被污染,或者装BUFFER的瓶子被污染了

我新配Buffer的时候,全是新换的。而且后面又继续新配了几批Buffer,也是一样的问题。
4楼2014-08-26 20:38:39
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