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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 组氨酸结合镍柱问题
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flll2014

铜虫 (小有名气)

[交流] 组氨酸结合镍柱问题 已有5人参与

请问下大家，我的目的蛋白里面中间有两个组氨酸，但是离的特别远，会结和在镍柱上面吗？一般的组氨酸标签不是六个组氨酸标签吗？为什么我的目的蛋白也会结合在柱子上呢？
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1楼 2014-08-24 22:48:49
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璧月

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9楼: Originally posted by 1020490511 at 2014-09-04 10:49:09
问一下楼主，你用的A液和B液分别是什么？我的重组his标签蛋白挂不上柱子，不知原因。谢谢！

我们这里也遇到过不挂柱的问题，不过拿出菌种重新做又好了，估计是因为菌种退化。
菌种退化不止是有不挂柱的情况，还会出现蛋白没活性的情况，这些还需要注意。
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11楼2014-09-04 12:23:37
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salanero2000

新虫 (初入文坛)
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能结合Ni应该是好事吧？
并不是说6个His都存在才能和Ni结合，只是为了保障有His暴露在外端。
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2楼2014-08-27 10:09:59
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flll2014

铜虫 (小有名气)
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2楼: Originally posted by salanero2000 at 2014-08-27 10:09:59
能结合Ni应该是好事吧？
并不是说6个His都存在才能和Ni结合，只是为了保障有His暴露在外端。

不是，我打算去his标签的，如果目的蛋白结合在镍柱上的话，那就没办法得到我的蛋白质了
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3楼2014-08-27 10:56:01
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salanero2000

新虫 (初入文坛)
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3楼: Originally posted by flll2014 at 2014-08-27 10:56:01
不是，我打算去his标签的，如果目的蛋白结合在镍柱上的话，那就没办法得到我的蛋白质了...

去His标签是不是需要看你目的蛋白和纯化标签之间是否存在酶切位点？
另外目的蛋白结合Ni柱洗脱不久不是可以得到你的蛋白质了吗？
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4楼2014-09-01 11:16:55
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