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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR扩出多条带
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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bomeijuan

银虫 (小有名气)

[交流] PCR扩出多条带

我提取微生物总DNA，经过IpCR 扩增16S rRNA以后，跑了电泳，本来正确结果应该是230bp左右一条很清晰的条带的，结果我的样品出来很多条带，最下面的引物二聚体很亮，都在100bp以下，目的条带若有若无，还有其他很多的非特异扩增，marker是100bp的。请问大家是什么原因，怎么改正？


[ Last edited by bomeijuan on 2008-4-14 at 21:10 ]
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1楼 2008-04-14 20:55:15
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xiukuncui

木虫 (正式写手)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):新虫,奖励一下
PCR特异性不高，建议提高一下温度，或者再加10%甲酰胺试一试
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2楼2008-04-14 21:05:13
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bomeijuan

银虫 (小有名气)
我加了4%的DMSO的
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3楼2008-04-14 21:11:22
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huang1962

银虫 (小有名气)
★
reasonspare(金币+1,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
做個溫度梯度試試。
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4楼2008-04-14 22:43:48
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xiaozhi_234

★
reasonspare(金币+1,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
建议提高退火温度
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5楼2008-04-14 22:54:45
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xxh8372

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫微笑研究僧
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢老兄,常来,我也觉得是,引物的问题,
需要多摸索,提高退火温度的同时,还可以选择设置模板剃度

另外,我觉得楼主还可以看一下你的引物是不是有问题

好了,祝你好运

[ Last edited by xxh8372 on 2008-4-14 at 23:24 ]
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____/\~~~/\,----(..)/\____//|(\|(^\/___\/\||__||__|-"
6楼2008-04-14 23:21:35
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annwt

木虫 (正式写手)
从图上看是非特异扩增，引物如果没有问题，就是PCR条件有问题，仔细检查PCR仪的条件设置，或提高温度。
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7楼2008-04-15 06:58:13
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bomeijuan

银虫 (小有名气)
怎么看引物是不是有问题，我的引物以前都能做出来的，而且效果还不错
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8楼2008-04-15 09:24:45
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tsingtao2008

木虫 (著名写手)

地球村村民
建议你用高保真DNA聚合酶, 效果会好些(不仅减少扩增错误,而且减少非特异条带数目,目的条带也更亮), 克隆后测序研究更好

[ Last edited by tsingtao2008 on 2008-4-15 at 12:53 ]
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钱要流动，人要走动
9楼2008-04-15 12:51:23
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AFM

木虫 (正式写手)
引物的浓度可适当降低一些？
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不要和我比懒，我懒得和你比。
10楼2008-04-15 12:56:27
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