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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 基因组DNA 酶切后条带不清晰，什么原因啊？
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xm_liu

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by chenguestc at 2014-08-24 11:30:41
弥散有几种可能，1，最开始提取的基因组DNA就有降解，这样的话无论你怎么切都会是弥散的。2，酶切在37度下的时间过长导致降解，可做两个实验对比一下排除这种可能。3，用其他公司的酶和你现在用的酶做个对比确定现 ...

最开始提的DNA我260/280大概在1.8左右，也跑过电泳，质量很好，是单一的条带，酶是新买的NEB的酶，这么看来有可能是酶切时间过长，我再试一下，谢谢！
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11楼2014-08-26 16:28:54
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xm_liu

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 令狐少陈 at 2014-08-24 11:28:15
我也遇到过类似的问题。
我建议你酶切时间少一点。切到6h左右取10ul跑一下，不行就继续切，行就全跑了。 那么抹，估计切久了吧。还有你基因组有没跑下啊？质量怎么样

基因组跑过，质量很好，是单一的条带，我试试减少酶切时间会不会好点，谢谢哈！
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12楼2014-08-26 16:33:55
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令狐少陈

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by xm_liu at 2014-08-26 16:33:55
基因组跑过，质量很好，是单一的条带，我试试减少酶切时间会不会好点，谢谢哈！...

嗯 先切一会 取一点跑跑看 不行就在继续切 不耽误时间 祝你成功
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多多交流，海纳百川
13楼2014-08-26 17:22:37
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
10楼: Originally posted by xm_liu at 2014-08-26 16:23:02
确实不到10ug，50ul酶切体系用的10ug的DNA，上样量是20ul，也就是上样量大概是4ug，用的是11个孔的梳子，应该是最小的孔了...

你这个好像是在切胶板子上照的，荧光会比较弱。
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14楼2014-08-26 18:26:14
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xm_liu

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 令狐少陈 at 2014-08-26 17:22:37
嗯 先切一会 取一点跑跑看 不行就在继续切 不耽误时间 祝你成功...

嗯，谢谢哈！
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15楼2014-08-27 08:14:30
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xm_liu

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
14楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2014-08-26 18:26:14
你这个好像是在切胶板子上照的，荧光会比较弱。...

是的，这个带太弱了，肉眼可以看见，凝胶成像仪拍不清楚，所以我用的相机拍
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16楼2014-08-27 08:16:39
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