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xm_liu

铁虫 (初入文坛)

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8楼: Originally posted by chenguestc at 2014-08-24 11:30:41
弥散有几种可能,1,最开始提取的基因组DNA就有降解,这样的话无论你怎么切都会是弥散的。2,酶切在37度下的时间过长导致降解,可做两个实验对比一下排除这种可能。3,用其他公司的酶和你现在用的酶做个对比确定现 ...

最开始提的DNA我260/280大概在1.8左右,也跑过电泳,质量很好,是单一的条带,酶是新买的NEB的酶,这么看来有可能是酶切时间过长,我再试一下,谢谢!
11楼2014-08-26 16:28:54
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xm_liu

铁虫 (初入文坛)

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7楼: Originally posted by 令狐少陈 at 2014-08-24 11:28:15
我也遇到过类似的问题。
我建议你酶切时间少一点。切到6h左右取10ul跑一下,不行就继续切,行就全跑了。 那么抹,估计切久了吧。还有你基因组有没跑下啊?质量怎么样

基因组跑过,质量很好,是单一的条带,我试试减少酶切时间会不会好点,谢谢哈!
12楼2014-08-26 16:33:55
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令狐少陈

铜虫 (小有名气)

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12楼: Originally posted by xm_liu at 2014-08-26 16:33:55
基因组跑过,质量很好,是单一的条带,我试试减少酶切时间会不会好点,谢谢哈!...

嗯 先切一会 取一点跑跑看 不行就在继续切 不耽误时间 祝你成功
多多交流,海纳百川
13楼2014-08-26 17:22:37
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

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10楼: Originally posted by xm_liu at 2014-08-26 16:23:02
确实不到10ug,50ul酶切体系用的10ug的DNA,上样量是20ul,也就是上样量大概是4ug,用的是11个孔的梳子,应该是最小的孔了...

你这个好像是在切胶板子上照的,荧光会比较弱。
14楼2014-08-26 18:26:14
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xm_liu

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
13楼: Originally posted by 令狐少陈 at 2014-08-26 17:22:37
嗯 先切一会 取一点跑跑看 不行就在继续切 不耽误时间 祝你成功...

嗯,谢谢哈!
15楼2014-08-27 08:14:30
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xm_liu

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
14楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2014-08-26 18:26:14
你这个好像是在切胶板子上照的,荧光会比较弱。...

是的,这个带太弱了,肉眼可以看见,凝胶成像仪拍不清楚,所以我用的相机拍
16楼2014-08-27 08:16:39
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