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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

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感谢参与,应助指数 +1
zhangxiwu123: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-08-24 18:36:21
1.可能质粒上有多个酶切位点,你在切空载体的时候因为被酶切的片段太小所以看不出来。
2.可能酶切体系甘油过多造成星效应。
21楼2014-08-24 10:09:32
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sunshine436

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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zhangxiwu123: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-08-24 18:36:08
fermentas的快切酶,如果只是鉴定的话,10分钟就可以跑电泳了,如果要回收的,切2h 足够,1ul的酶切2ug 的质粒是没问题的,你这个情况说不准是哪的问题,只能全部重新做了,一周时间也还好,挺快的。

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22楼2014-08-24 11:15:53
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WOAIDACHANG

禁言 (正式写手)

本帖内容被屏蔽

23楼2014-08-24 13:14:17
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zhangxiwu123

新虫 (正式写手)

引用回帖:
21楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2014-08-24 10:09:32
1.可能质粒上有多个酶切位点,你在切空载体的时候因为被酶切的片段太小所以看不出来。
2.可能酶切体系甘油过多造成星效应。

嗯,第一种真是有可能,第二种,你的意思是,buffer里面所含的甘油多引起星效应吗?星效应具体是什么意思呢?
24楼2014-08-24 18:25:57
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zhangxiwu123

新虫 (正式写手)

引用回帖:
22楼: Originally posted by sunshine436 at 2014-08-24 11:15:53
fermentas的快切酶,如果只是鉴定的话,10分钟就可以跑电泳了,如果要回收的,切2h 足够,1ul的酶切2ug 的质粒是没问题的,你这个情况说不准是哪的问题,只能全部重新做了,一周时间也还好,挺快的。
...

我用的好像不是快切酶,切了16个小时,还是有切不开的。
25楼2014-08-24 18:26:44
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zhangxiwu123

新虫 (正式写手)

引用回帖:
23楼: Originally posted by WOAIDACHANG at 2014-08-24 13:14:17
做出来,记得告诉我,加油...

好的,非常感谢。我觉得还有一种可能,是连接的时候,很多载体自连了,也有与目的基因连住了,所以会出现那种情况。
26楼2014-08-24 18:28:13
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linhehu

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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载体里面有酶切位点。直接测序比对吧。方便省事

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在知识的海洋里裸泳
27楼2014-08-24 18:48:02
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

引用回帖:
24楼: Originally posted by zhangxiwu123 at 2014-08-24 18:25:57
嗯,第一种真是有可能,第二种,你的意思是,buffer里面所含的甘油多引起星效应吗?星效应具体是什么意思呢?...

甘油浓度超过5%的时候,内切酶的特异性变差,能酶切序列相似的位点。
28楼2014-08-24 19:53:32
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sunshine436

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
25楼: Originally posted by zhangxiwu123 at 2014-08-24 18:26:44
我用的好像不是快切酶,切了16个小时,还是有切不开的。...

你测一下浓度,可以少切点,做连接的话,载体有一点就行。

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29楼2014-08-24 21:26:20
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sunshine436

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
24楼: Originally posted by zhangxiwu123 at 2014-08-24 18:25:57
嗯,第一种真是有可能,第二种,你的意思是,buffer里面所含的甘油多引起星效应吗?星效应具体是什么意思呢?...

有星号活性的酶,不能切太长时间,一般2个小时,时间再长会乱切,BamHI好像是有星号活性。

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30楼2014-08-24 21:29:56
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