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小连翘

银虫 (小有名气)

[交流] 求助:HPLC(已解决,谢谢大家)

最近做HPLC,分析条件如下:
色谱柱:welchrom ODS  4.6×250mm 5um
流动相:10mMKH2PO4水溶液:H3PO4:甲醇=10:0.05:100
流  速:1.0ml/min
柱温箱:30℃
检测波长:203nm

但是进样后发现直接流动相进样也会出峰,谱图如附件

流动相是人工混合好的,怎么还会有谱峰出现,请各位帮帮忙分析一下了,谢谢!

[ Last edited by 小连翘 on 2008-4-15 at 19:08 ]
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哇蛤哈

金虫 (小有名气)

楼主用的波长为203nm属于低波长,低波长下流动相也很容易出峰,这种现象很正常,见怪不怪!~^_^~
4楼2008-04-14 16:55:52
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查看全部 8 个回答

jjf4085

木虫 (正式写手)

楼主的流动相主要是盐与有机相,按理是不会出峰的,建议楼主重新配流动相,再试一下;再有可能就是没平衡好或这根柱子以前做过别的东西没有冲洗干净,可以先冲一下柱子,重配流动相后小流速平衡一夜,第二天再试一下!
2楼2008-04-14 16:31:34
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xy4585618

荣誉版主 (著名写手)

小木虫

引用回帖:
Originally posted by 小连翘 at 2008-4-14 14:27:
最近做HPLC,分析条件如下:
色谱柱:welchrom ODS  4.6×250mm 5um
流动相:10mMKH2PO4水溶液:H3PO4:甲醇=10:0.05:100
流  速:1.0ml/min
柱温箱:30℃
检测波长:203nm

但是进样后发现直接流动 ...

我认为可能是1、流动相污染(包括你用的缓冲盐、酸及有机溶剂) 2、系统不干净 3、色谱柱污染    4、建议把甲醇换成乙腈
  不知楼主做的什么成分,可以试一下蒸发光检测器!
建议楼主要是有液相方面的问题,可以去分析板块,找一下“专题应助之:液相色谱以及液质联用”,那里人较多,专门解决问题!
是也罢,非也罢,是是非非争个啥。河东河西三十年,对的错啦,错的对拉!得也罢,失也罢,患得患失误年华。凡事该做尽管做,得了更好,失也没啥!
3楼2008-04-14 16:33:25
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小连翘

银虫 (小有名气)

谢谢大家的帮忙,后来我们发现是进样的时候的问题,我们使用的是一次性的注射器进样,后来换成玻璃进样针,问题就解决了
5楼2008-04-15 19:06:04
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