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小-丑鱼

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[交流] 为什么实验时用到ROX,而在分析时却取消ROX选择NONE

无论是否选择ROX做为passive reference,在component的分析模式下FAM和VIC都有扩增的曲线,而且在选择ROX的情况下,显示的是一条为0的直线,但是在amplification plot的模式下,选择了ROX就变成什么信号也没有了,取消ROX就FAM和VIC就正常了。

这是为什么呢?

有人探索了一下,发现扩增曲线校正公式---“检测荧光值除以参比荧光值”,如果参比荧光值为0,则校正荧光值(Rn)为0。那么他说可能就是这个原因,ROX荧光值为0,根据计算后Rn也为0,没有扩增曲线,如果取消ROX参比荧光后,则component的曲线坐标和amplification plot的曲线坐标是一样的,则会显示出实际的扩增曲线。

还有人说,校正荧光ROX的强度比较高,当你样品的荧光强度较低时,会被ROX的荧光所掩饰,就是说你的目的荧光强度还没有试剂盒本身校正荧光的强度高,所以你的曲线看起来是平的或者甚至是负的;当把ROX屏蔽以后,曲线就变为正常的曲线。

我就比较疑惑了,有没有比较权威的解释,实在不明白,请大家多多指教,谢谢!
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