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baoyu166

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baoyu166(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-20 16:55:48
直接转化也能长菌落,提取质粒以后鉴定,应该是pFastBacHTA载体,相当于克隆了pFastBacHTA载体DNA。
人生贵在行动,迟疑不决时,不妨先迈出小小一步。
2楼2014-08-20 13:46:42
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baoyu166

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3楼2014-08-20 16:24:19
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引用回帖:
3楼: Originally posted by baoyu166 at 2014-08-20 16:24:19
使用EcoR1和BamH1对载体进行酶切,酶切片段很短,电泳不能区分是否切开,请问如何鉴别已经切开了呢??...

直接将菌液送到测序公司测序
人生贵在行动,迟疑不决时,不妨先迈出小小一步。
4楼2014-08-20 21:21:18
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鬼羽帝魂

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baoyu166: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-08-21 10:26:28
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-21 18:04:12
如果双酶切完全了  载体不与片段连接按理不会有单克隆,但实际上可能会长几个的,因为菌有自身修复的作用。
你切下的片段太小的话,就一个一个进行单酶切,确保第一个完全酶切后,乙醇沉淀回收在进行第二个酶切。
连接的时候做个载体+水,载体+片段两个,载体+水作对照。
如果载体+水长的比载体+片段明显少,那就挑了。
如果二者相差无几,那就重切载体。
5楼2014-08-21 10:03:50
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