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baoyu166

禁虫 (初入文坛)
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1楼 2014-08-20 10:46:37
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
baoyu166: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-08-21 10:26:28
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-21 18:04:12
如果双酶切完全了  载体不与片段连接按理不会有单克隆，但实际上可能会长几个的，因为菌有自身修复的作用。
你切下的片段太小的话，就一个一个进行单酶切，确保第一个完全酶切后，乙醇沉淀回收在进行第二个酶切。
连接的时候做个载体+水，载体+片段两个，载体+水作对照。
如果载体+水长的比载体+片段明显少，那就挑了。
如果二者相差无几，那就重切载体。
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5楼2014-08-21 10:03:50
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飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
baoyu166(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-20 16:55:48
直接转化也能长菌落，提取质粒以后鉴定，应该是pFastBacHTA载体，相当于克隆了pFastBacHTA载体DNA。
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人生贵在行动，迟疑不决时，不妨先迈出小小一步。
2楼2014-08-20 13:46:42
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baoyu166

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3楼2014-08-20 16:24:19
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飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人
引用回帖:
3楼: Originally posted by baoyu166 at 2014-08-20 16:24:19
使用EcoR1和BamH1对载体进行酶切，酶切片段很短，电泳不能区分是否切开，请问如何鉴别已经切开了呢？？...

直接将菌液送到测序公司测序
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人生贵在行动，迟疑不决时，不妨先迈出小小一步。
4楼2014-08-20 21:21:18
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