14楼: Originally posted by sunshine436 at 2014-08-20 21:45:21
HD-infusion很好用，你把载体双酶切，回收，片段PCR，设计引物时，按照说明书是片段和载体重合15个碱基，载体两个酶切位点的粘性末端多出来的几个碱基也算在15个里面，用kit，50°15min即可转化。
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20楼: Originally posted by andyzhengwp at 2014-08-21 15:26:34
中文的说明书，各种都有实验条件都有，第一次就按里面说的做的，和这次结果跑出来的带是一样的。我想问问这个infusion 可以中间链接几个片段吗？几个片段之间都有接头，和线性化质粒混合到一起可以连上吗？...

22楼: Originally posted by ksws0465326 at 2014-08-21 15:58:07
我只用in fusion连过两个片段，连三个以上片段的我用的overlap。。。，中间的片段的两段分别同两边的片段有一段相同序列，然后用前段片段的正向引物，加上最后一段片段的末端反向引物体系中加入三个片段直接进行pc ...

21楼: Originally posted by andyzhengwp at 2014-08-21 15:27:17
我想问问这个infusion 可以中间链接几个片段吗？几个片段之间都有接头，和线性化质粒混合到一起可以连上吗？...

10楼: Originally posted by ksws0465326 at 2014-08-20 11:19:16
按正常情况的话，如果序列相同的质粒和线性化条带跑电泳，应该差不多，质粒会稍微慢一点儿，但没做过对比，不清楚，呵呵，一般我跑都是1%的胶100v跑40－50分钟。。5000的marker可以分得很清。还有，单跑质粒的时候 ...

24楼: Originally posted by sunshine436 at 2014-08-21 16:38:42
可以的，三个片段我都做过，要是片段太大效率会低，你算好这几个片段和载体的比例
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27楼: Originally posted by anlijun at 2015-07-20 17:31:10
请问，如果是两个片段的话，片段和载体的比例怎么算呢？多谢了...